Page 114 - 《中国药科大学学报》2026年第2期

学报
240 Journal of China Pharmaceutical University 2026, 57(2): 240 − 245

小分子化合物 Lyb24 与二氢乳清酸脱氢酶 PyrD 的相互作用研究

孙嘉荣 ，王淑燕 ，黄 维 ，鲁 超 1,4*
2
2,3
1,2
2
3
1
（ 安徽理工大学第一附属医院, 淮南 232007； 深圳市人民医院检验科, 深圳 518020； 深圳市呼吸系统疾病临床医学研究中
4
心, 深圳市呼吸疾病研究所, 深圳市人民医院, 深圳 518020； 安徽理工大学第一附属医院药物临床试验研究中心, 淮南
232007）
摘 要 本研究旨在探索小分子化合物 Lyb24 与肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae，KP）嘧啶生物合成途径关键酶
PyrD 之间的相互作用以及 Lyb24 对 PyrD 酶催化活性的影响，为新型抗菌药物的开发提供理论依据。实验通过
NdeⅠ/XbaⅠ双酶切技术构建 pET-30a（+）-PyrD 重组质粒，并利用热激法将其转化至大肠埃希菌 BL21（DE3）感受态细
胞。在 0.3 mmol/L 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside，IPTG）诱导下，于 16 ℃ 条件下诱导重组
蛋白表达。采用镍-氮三乙酸（nickel-nitrilotriacetic acid，Ni-NTA）亲和色谱法纯化重组 PyrD 蛋白，获得高纯度产物。通过表
面等离子共振（surface plasmon resonance，SPR）实验检测 Lyb24 与 PyrD 蛋白之间的直接相互作用，并利用基于 2，6-二氯酚
靛酚的比色法评估 Lyb24 对 PyrD 催化活性的影响。实验成功构建了 pET-30a（+）-PyrD 质粒，表达并纯化出浓度为 5.58
mg/mL 的相对分子质量约为 36 kD 的重组 PyrD 蛋白。Lyb24 与 PyrD 能够发生高亲和力的直接结合（K D = 8.83 × 10 −5
mol/L），且 Lyb24 对 PyrD 的酶活性具有反竞争性抑制作用。本研究揭示了小分子化合物 Lyb24 可与 PyrD 发生直接结合，以及
对其功能的抑制作用，为开发以 PyrD 为靶点的新型抗菌制剂提供了重要的实验依据和数据支持，具有潜在的临床应用价值。
关键词 肺炎克雷伯菌；抑制剂；Lyb24；PyrD；机制研究
中图分类号 R969.2 文献标志码 A 文章编号 1000−5048(2026)02−0240−06
doi：10.11665/j.issn.1000−5048.2025082602

引用本文 孙嘉荣，王淑燕，黄维，等. 小分子化合物 Lyb24 与二氢乳清酸脱氢酶 PyrD 的相互作用研究 [J]. 中国药科大学学报，2026，
57（2）：240-245.

Cite this article as: SUN Jiarong, WANG Shuyan, HUANG Wei, et al. Study on the interaction between small molecule Lyb24 and
dihydroorotate dehydrogenase PyrD[J]. J China Pharm Univ, 2026, 57(2): 240-245.

Study on the interaction between small molecule Lyb24 and dihydroorotate
dehydrogenase PyrD

2
2,3
1,2
SUN Jiarong , WANG Shuyan , HUANG Wei , LU Chao 1,4*
2
1 The First Affiliated Hospital of Anhui University of Science and Technology, Huainan 232007; Department of Clinical Laboratory,
3
Shenzhen People's Hospital, Shenzhen 518020; Shenzhen Clinical Medical Research Center for Respiratory Diseases, Shenzhen
4
Institute of Respiratory Diseases, Shenzhen People's Hospital, Shenzhen 518020; Drug Clinical Trial Research Center, The First
Affiliated Hospital of Anhui University of Science and Technology, Huainan 232007, China
Abstract This study aimed to explore the interaction between the small molecule Lyb24 and PyrD, a key
enzyme in the pyrimidine biosynthesis pathway of Klebsiella pneumoniae (KP), and the effect of Lyb24 on the
catalytic activity of PyrD, thus to provide a theoretical basis for the development of novel antimicrobial agents.
The pET-30a(+)-PyrD recombinant plasmid was constructed using Nde I/Xba I double digestion technology and
was transformed into Escherichia coli BL21 (DE3) competent cells using the heat-shock method. The
recombinant protein was induced at 16 ℃ with 0.3 mmol/L isopropyl β-D-thiogalactopyranoside (IPTG). The
recombinant PyrD protein was purified using nickel-nitrilotriacetic acid (Ni-NTA) affinity chromatography to

收稿日期 2025-08-26 * 通信作者 E-mail：chaolu@aust.edu.cn
基金项目 深圳市呼吸系统疾病临床医学研究中心课题（LCYSSQ20220823091203007）