Page 118 - 《中国药科大学学报》2026年第2期

244 学报 Journal of China Pharmaceutical University 2026, 57(2): 240 − 245 第 57 卷

−1
−1
利用 GraphPad Prism 8.0.2 软件根据吸收度绘制标 速率（µmol·L ·min ），以底物浓度 [S] 为横坐标、
准曲线并计算得出标准曲线 R ≥ 0.999。 反应速率为纵坐标，利用 GraphPad Prism 8.0.2 绘
2
采用基于 DCIP 的比色法评估 Lyb24 对 PyrD 制 Michaelis-Menten 图与 Lineweaver-Burk 双倒数
活性的抑制作用。如先前研究所述，DCIP 的还原 图。如图 3 所示，随着 Lyb24 浓度升高，PyrD 的最
量可以作为 DHO 氧化量的等价化学计量。反应体 大反应速率（V max ）呈剂量依赖性降低。此外，结果
系中包含 200 µmol/L CoQ0 和 150 µmol/L DCIP 作 表 明 ， Lyb24 是 DHO 的 反 竞 争 性 抑 制 剂 ， 导 致
为电子受体。根据标准曲线方程计算出 DHO 氧化 V ma x 及 K 均降低（表 1）。
m

A PyrD (0.3 μmol/L) B PyrD (0.3 μmol/L)

8 0 μmol/L
V/(μmol·L −1 ·min −1 ) 6 4 35 μmol/L 2.0 0 μmol/L
17.5 μmol/L
1.5
17.5 μmol/L
70 μmol/L
2 1/V 1.0 35 μmol/L
70 μmol/L
0.5
0
0 100 200 300 400 −0.04 −0.02 0.02 0.04 0.06
DHO/(μmol/L) −0.5 1/S
Figure 3 Inhibitory effect of Lyb24 on PyrD enzyme activity
A:Michaelis-Menten plot: PyrD concentration was fixed at 0.3 μmol/L. Enzymatic reactions were initiated by adding DHO substrate at 0, 50, 100,
200, and 400 μmol/L in the presence of Lyb24 at 0, 17.5, 35, and 70 μmol/L. The amount of reduced DCIP was measured to calculate the average
reaction rate; B: Lineweaver-Burk plot; This Lineweaver-Burk (double-reciprocal) plot was generated from the data presented in Figure 3-A

Table 1 Effect of Lyb24 on the Michaelis-Menten kinetic 途径作为主要合成核苷酸的主要方式。其中，由
parameters of PyrD
PyrD 催化，经 DHO 氧化并生成 OA，是嘧啶核苷酸
−
Lyb24/（µmol/L） V max /（µmol·L ¹·min ¹） Km 从头合成途径中的关键一步 。鉴于其在重要生理
−
[13]
17.5 3.40 ± 0.49 44.77 ± 6.40
过程中的关键作用，PyrD 被认为是开发新型抗生素
35 2.42 ± 0.42 36.70 ± 11.98
[14]
的理想靶标 。目前，PyrD 抑制剂在抗真菌方面
70 1.83 ± 0.34 35.79 ± 18.27
取得了较大的成功，氟菌喹啉（quinofumelin）作为

以 PyrD 为靶点的抗真菌药，在农业方面已广泛应
4 讨 论
[15]
用 。Olorofim 和国内自主研发的 SG1001 均是以
作为重要的代谢物之一，核苷酸在细菌的生 PyrD 为靶点的新型抗真菌药物，目前都已进入临
长、能量代谢及信号传导等方面发挥着不可或缺的 床试验 [16−17] 。然而，有关 PyrD 抑制剂在抗细菌方
作用，主要表现在：（1）作为遗传物质的基本组成单 面的应用报道则不多。最近的一项转座子筛选研
位参与构成 DNA 和 RNA；（2）以 ATP 和 GTP 的形 究 已 鉴 定 出 Nordihydroguaiaretic acid（ NDGA） 和
式为细菌的各种代谢活动提供能量；（3）环腺苷酸、 Chlorhexidine（CHX）对 PyrD 具有显著抑制其活性
环鸟苷酸、环二鸟苷酸等分子可作为第二信使， 的作用。另外，上述化合物还可以增强头孢他啶在
广泛参与细菌信号传导，调节细菌重要生理过程； 铜绿假单胞菌中的抗菌活性 。
[18]
（4）作为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、黄素腺嘌呤二核 本研究在前期已发表的研究成果基础上，经重
苷酸及辅酶 A 等的组成成分，参与催化包括氧化还 组蛋白制备，小分子蛋白相互作用及酶活实验，明
原反应等多种重要的生物化学过程 [8−10] 。另外，在 确了小分子化合物 Lyb24 与 KP 来源的 PyrD 的直
细菌的蛋白质合成及致病性等方面，核苷酸也发挥 接相互作用，以及对其酶催化活性的抑制作用。以
着重要的作用 [11−12] 。 上结果提示 Lyb24 具有成为新型抗菌制剂的潜能。
核苷酸的生物合成主要分为从头合成和补救 然而，前期的研究结果表明，Lyb24 本身并不具有抗
合成两条途径，正常生理状态下，细菌以从头合成 菌活性 。因此，对 Lyb24 进行必要的结构改造，值
[6]