Page 122 - 《中国药科大学学报》2026年第2期

248 学报 Journal of China Pharmaceutical University 2026, 57(2): 246 − 255 第 57 卷

（1）假手术组；（2）MCAO/R 模型组；（3）吲哚布芬 2.7 分子机制研究
（20 mg/kg）组；（4）阿司匹林（10 mg/kg）组。体内实 实 时 荧 光 定 量 PCR： TRIzol 法 提 取 脑 组 织
验分为 5 d 预防性给药（预防实验）与 15 d 治疗性 RNA，HiScript Ⅱ试剂盒（诺唯赞生物）合成 cDNA，
给药（治疗实验）。预防实验中，连续灌胃给药 5 d， SYBR Green 法检测 IL-18、IL-1β、NLRP3 mRNA
末次给药 30 min 后行 MCAO/R 手术；治疗实验中， 表达（引物由生工生物合成），以 β-actin 为内参。
术后 3 h 开始给药，每日 1 次，持续 15 d。 引物序列如下：
2.2 给药方案 Rat IL-18-F: ACCGCAGTAATACGGAGCAT;
为了与临床口服给药一致 ，本研究在动物实 R: GTCTGGGATTCGTTGGCTGT
[10]
验中选择了吲哚布芬、阿司匹林的灌胃给药途径， Rat IL-1β-F: AGGCTGACAGACCCCAAAAG;
两种药物的给药方案根据相应临床剂量转化 。吲 R: CTCCACGGGCAAGACATAGG
[11]
哚布芬（华海药业，批号 K3920）与阿司匹林（上海源 Rat NLRP3-F: GTGGAGATCCTAGGTTTCTC
叶生物科技有限公司）均以 CMC-Na 溶解。灌胃体 TG; R: CAGGATCTCATTCTCTTGGATC
积为 0.5 mL/100 g 体重，假手术组与模型组给予等 Rat-β-actin-F: AGACCTTCAACACCCCAG;
体积 CMC-Na。 R: CACGATTTCCCTCTCAGC

2.3 MCAO/R 模型构建 TUNEL/GSDMD 共 定 位 ： GSDMD 抗 体
参照 Longa 等 [12] 的线栓法建立 MCAO/R 模 （Abbexa，1∶100）与 TUNEL 试剂盒（凯基生物）联用
型。缺血 2 h 后拔除线栓实现再灌注，术中维持体 检测焦亡细胞。
温（37±0.5）℃。假手术组仅分离血管不插入线栓。 2.8 统计分析
术后按 Bederson 神经功能评分筛选造模成功大鼠 数据以 x ± s 表示，行为学数据采用 Kruskal-
（评分≥1 分者纳入实验）。 Wallis 检验，MWM 空间探索实验采用单因素方差
2.4 神经功能评价 分析（ANOVA），方差齐性数据用 Bonferroni 法，非
神经功能缺损评分：缺血再灌注 24 h 后按 齐性数据用 Dunnett T3 法（IBM SPSS 25.0）。P<
Bederson 等 [13] 的神经功能评分法评分（0~4 分）。 0.05代 表 差 异 具 有 统 计 学 意 义 ， 图 像 处 理 采 用
肢体不对称试验与姿势反射试验：治疗实验 Photoshop 2020，数据分析采用 Image J 与 GraphPad
中，于术后第 2、5、10、15 天给药 30 min 后检测。 Prism 8.0。
Morris 水迷宫（MWM）：治疗实验第 10 天起进
3 结 果
行可见平台训练（第 10~11 天）、隐藏平台训练（第
12~14 天）及空间探索实验（第 15 天），记录逃避 3.1 吲哚布芬预处理可减轻 MCAO/R 大鼠脑缺血
潜伏期、目标象限停留时间百分比及穿越平台 损伤
[14]
次数 。 采用 MCAO/R 模型构建大鼠脑缺血损伤模型
2.5 脑梗死体积与脑水肿测定 （实验流程见图 1-A） 。TTC 染色定量分析显示，
[18]
TTC 染色：取脑切片经 2% TTC（生工生物）染 模型组大鼠再灌注 24 h 后缺血侧脑组织呈典型苍
色计算梗死体积 。梗死体积（%）=（左半球面积 白色梗死灶，梗死体积占比达（32.73 ± 1.83） %（图 1-
[15]
－右半球非梗死区面积）/左半球面积×100。 C~1-D），表明模型构建成功。药效学结果显示，吲
脑含水量：脑组织称湿重后 110 ℃ 烘至恒 哚布芬预处理组脑梗死体积缩小至（15.03 ± 2.20）%
[16]
重。脑含水量（%）=（1−干重/湿重）×100 。 （P<0.01），其效果优于阿司匹林对照组（20.20 ±
2.6 细胞实验 2.55） %。同时，脑组织含水量研究表明，吲哚布芬
OGD/R 模型：HUVECs 细胞分为：（1）对照组； 组与阿司匹林组均较模型组显著降低（P<0.05）。
（2）OGD/R 组；（3）吲哚布芬（200 μmol/L）组；（4）阿 Bederson 神经功能评分进一步证实，吲哚布芬组与
司匹林（100 μmol/L）组，药物预处理 24 h 后，换无 阿司匹林组评分显著低于模型组（P<0.01，图 1-F），
糖 DMEM 于 95% N 、5% CO 环境培养 4 h，复氧 表明其神经保护作用。
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[17]
2 h 。 通过进一步检测血栓素 A （TXA ）与前列环素
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