Page 185 - 《水产学报》2025年第8期

曹磊，等 水产学报, 2025, 49(8): 089416

1 2 3 1 2 3 1 2 3 ku WT、ΔT3SS 和 ΔeseJ 菌株在其中的定殖水平。
PPARγ 58
0 h 针对编码 PPARγ 的开放阅读框序列，实验共设
Actin 42
PPARγ 58 计了靶向不同位置的 3 条 siRNA 序列，qRT-
1 h 的敲降效果最明显 (图 3-b)。
Actin 42 PCR 分析显示，si3
PPARγ 58 与 WT 在 J774A.1 细胞中的定殖水平相比，WT
3 h
Actin 42 在 PPARγ 敲降的 J774A.1 细胞中的定殖水平显
PPARγ 58 倍) (图 和
5 h 著下降 (3.5 3-a)。同时，ΔT3SS ΔeseJ
Actin 42
PPARγ 58 菌株在 PPARγ 敲降的 J774A.1 细胞中的定殖水
8 h 平与未敲降 PPARγ 的 细胞中的定殖水
Actin 42 J774A.1
平相似 (图 3-a)。但在 PPARγ 敲降的 细
(a) J774A.1
胞中，WT 的定殖能力仍强于 ΔT3SS 和 ΔeseJ
***
菌株，表明还存在其他效应因子和宿主蛋白介
****
MOCK
100
PPARγ 相对表达量 PPARγ relative expression 120 杀鱼爱德华氏菌 ** *** *** 2.4 EseJ 上调 PPARγ 表达对促炎因子表达的
导杀鱼爱德华氏菌在巨噬细胞中的定殖过程。
80
E. piscicida
ΔT3SS
60
40
影响
**
30
PPARγ 表达上调有助于缓解感染所引起炎
20
10
0 * * * 症反应 [30-31] 。实验利用 PPARγ 敲降的 J774A.1
0 1 3 5 8 细胞和 PPARγ 抑制剂 GW9662 处理的 J774A.1
感染后时间/h 细胞，通过 qRT-PCR 检测相关细胞感染 WT
time post-infection
和 ΔeseJ 菌株后炎症相关细胞因子表达 (图 4-
(b) a～h)。与未感染 J774A.1 的细胞相比，感染
图 1 杀鱼爱德华氏菌利用 T3SS 对 J774A.1 细胞中
WT 的 J774A.1 细胞表现出促炎和抗炎相关细胞
PPARγ 表达的影响
因子的显著上调 (1.30~5.34 倍)，这可能是由于
(a) Western blot， 1. 未经处理的 J774A.1 细胞的 PPARγ 表达水平作
杀鱼爱德华氏菌感染引起较强的免疫应答。与
为对照 (MOCK)，2. 杀鱼爱德华氏菌，3. ΔT3SS；(b) Western blot
WT 感染相比，ΔeseJ 菌株的感染显著增强了促
灰度分析。“*” P < 0.05，“**”P < 0.01，“***”P < 0.001，“****”P
< 0.000 1，下同。 炎性细胞因子 (IL-1β、TNF-α、IL-12p40、CCL2
Fig. 1 Effecs of T3SS on the expression of PPARγ in 和 CXCL10) 表达并减弱抑炎性细胞因子 (IL-10
J774A.1 cells infected with WT 和 STAT6) 表达，表明效应蛋白 EseJ 抑制巨噬
(a) Western blot, 1. PPARγ expression level in untreated J774A.1 cells 细胞炎症反应。同时，PPARγ 的敲降表达和
as control (MOCK), 2. E. piscicida, 3. ΔT3SS; (b) the gray-scale ana-
PPARγ 抑制剂 GW9662 处理结果进一步证明了
lysis of Western blot; “*” P < 0.05, “**” P < 0.01, “***”P < 0.001, and
“****” P < 0.000 1, the same below. 杀鱼爱德华氏菌利用效应蛋白 EseJ 促进 PPARγ
表达，从而降低宿主免疫细胞炎症反应。
在 J774A.1 细胞中的定殖情况进行检测。结果
病原菌感染引起的细胞线粒体损伤会激活
显示，ΔeseJ 缺失株在 J774A.1 细胞中的定殖能
抗菌和炎症反应 。因此，本研究通过检测线
[32]
力明显弱于 WT 菌株 (3.95 倍, P ＜ 0.000 1) (图 3-
粒体 DNA (mtDNA) 的泄露水平来确定过程中
a)。尽管 Δ1 586 (2.17 倍)、Δ3 282 (2.11 倍)、Δ2 188
PPARγ 水平对线粒体损伤的影响。与未感染的
(2.14 倍)、Δ1 757 (1.18 倍) 和 Δ2 186 (1.31 倍) 缺
J774A.1 细 胞 相 比 ， WT 感 染 导 致 细 胞 质 中
失株在 J774A.1 细胞中的定殖水平也存在一定
mtDNA 含量显著升高 (约 2.1 倍)，这可能与感
程度下降，但仍高于 ΔT3SS 突变株的定殖水平 染引发的氧化应激相关 (图 5-a, b)。感染 ΔeseJ
(图 3-a)。 菌株的 J774A.1 细胞质中 mtDNA 含量进一步升
为了验证杀鱼爱德华氏菌在宿主细胞中的 高，提示 EseJ 可以缓解病原菌感染引起的线粒
定殖能力是否与 EseJ 上调的 PPARγ 表达有关， 体损伤 (图 5-a, b)。另一方面，与感染 WT 的
实验构建了 PPARγ 敲降的 J774A.1 细胞并检测 J774A.1 细胞相比，PPARγ 敲降和 GW9662 处

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