Page 181 - 《水产学报》2025年第8期

曹磊，等 水产学报, 2025, 49(8): 089416

表 1 本实验中使用的菌株和质粒
Tab. 1 Strains and plasmids used in the experiment
菌株和质粒 strain and plasmid 描述 description 来源 source
菌株 strain
大肠杆菌 E. coli
DH5α λpir 用于质粒构建、扩增 实验室保存
SM10 λpir 接合实验的供体菌 实验室保存
BTH101 用于细菌双杂交 实验室保存
杀鱼爱德华氏菌 E. piscicida
EIB202 野生型杀鱼爱德华氏菌，(CCTCC M 208 068)，多黏菌素抗性，氯霉素抗性 实验室保存
ΔeseJ 删除eseJ基因的EIB202 实验室保存
ΔeseJ::eseJ 回补pUTt-eseJ-HA质粒的ΔeseJ，羧苄青霉素抗性 本研究
ΔT3SS 敲除eseB、eseC、eseD基因的EIB202 实验室保存
Δ1 586 敲除ETAE_1 586基因的EIB202 实验室保存
Δ1 604 敲除ETAE_1 604基因的EIB202 实验室保存
Δ1 757 敲除ETAE_1 757基因的EIB202 实验室保存
Δ2 186 敲除ETAE_2 186基因的EIB202 实验室保存
Δ2 188 敲除ETAE_2 188基因的EIB202 实验室保存
Δ3 282 敲除ETAE_3 282基因的EIB202 实验室保存
EIB202∆P/eseJ-2HA + 在eseJ基因后插入2个HA标签的EIB202，多黏菌素抗性 本研究
EIB202∆P/glms-2HA + 在glms基因后插入2个HA标签的EIB202，多黏菌素抗性 本研究
质粒 plasmid
pDM4 依赖于pir的自杀质粒，氯霉素抗性 实验室保存
pUTt 回补质粒，羧苄青霉素抗性 实验室保存
pUTt-eseJ-2HA 携带2HA-tagged eseJ的pUTt质粒，羧苄青霉素抗性 本研究
SM10-eseJ-2HA 携带2HA-tagged eseJ的SM10质粒，卡那霉素抗性 本研究
SM10-glms-2HA 携带2HA-tagged glms的SM10质粒，卡那霉素抗性 本研究
pUT18 用于细菌双杂交的质粒，羧苄青霉素抗性 实验室保存
pUT18-eseJ 带有全长eseJ的pUT18，羧苄青霉素抗性 本研究
pUT18-eseJ A 带有eseJ-A片段的pUT18，羧苄青霉素抗性 本研究
pUT18-eseJ B 带有eseJ-B片段的pUT18，羧苄青霉素抗性 本研究
pUT18-eseJ C 带有eseJ-C片段的pUT18，羧苄青霉素抗性 本研究
pKT25 用于细菌双杂交的质粒，卡那霉素抗性 实验室保存
pKT25-NDUFA7 带有NDUFA7的pKT25，卡那霉素抗性 本研究

华氏菌，并在 35°C Opti-MEM TM 培养基 (Gibco， 质粒中获得靶基因片段以及含有 25 bp 质粒同
美国) 中培养 5 h。在细胞转染实验中，每孔添 源序列的线性化载体，使用 ClonExpress Ⅱ One
加 2 μL 20 μmol/L 靶向 PPARγ 的 siRNA 和 2 μL SteP Cloning Kit (南京诺唯赞生物科技股份有限
转染试剂 (Zeta Life，美国)，转染后 24 h 检测 公司) 构建重组质粒，通过钙转化法将重组质粒
其转录水平，48 h 后检测其翻译表达水平。每 导入大肠杆菌受体细胞中，通过菌落 PCR 和
组实验均设计未处理的 J774A.1 细胞 (MOCK) DNA 测序确定阳性克隆。用于质粒构建的引物
作为对照。 信息见表 2。

重 组 质 粒 通 过 钙 转 化 法 转 入 大 肠 杆 菌
1.3 质粒与菌株构建
SM10 λpir。 含 有 重 组 质 粒 的 大 肠 杆 菌 SM10
通过 PCR 从杀鱼爱德华氏菌基因组和原始 λpir 与杀鱼爱德华氏菌混合，在 LB 琼脂平板上

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