Page 180 - 《水产学报》2025年第8期
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曹磊，等                                                                  水产学报, 2025, 49(8): 089416

              广泛研究，成为探究其他胞内寄生菌致病机制                             节脂质积累以及脂肪细胞的分化和成熟；在巨
              的重要模式菌        [1-2] 。在感染过程中，结核分枝杆                噬细胞中，PPARγ 则作为免疫和代谢的枢纽 。
                                                                                                        [17]
              菌通过激活巨噬细胞表面的              TLR2  受体下调     NF-     PPARγ 在小鼠 (Mus musculus) 感染肺炎链球菌
              κB  信号通路，从而抑制炎症因子分泌，创造有                          (Streptococcus pneumoniae) 期间能够改善小鼠肺
                                       [3]
              利于自身生存的胞内环境 。另一方面，巨噬                             部炎症反应，从而提高小鼠存活率                   [18] 。此外，
              细胞通过自噬、凋亡、炎性小体激活、吞噬体                             使用  PPARγ 激动剂吡格列酮治疗可以诱导单核
              酸化以及抗菌肽产生等多种机制来控制和清除                             细胞产生活性氧 (ROS)，以对抗金黄色葡萄球
              结核分枝杆菌 。与结核分枝杆菌不同，沙门                             菌 (S. aureus) 感染 [19] 。然而在巨噬细胞中，维
                            [4]
              氏菌在进入细胞后寄生于特定的含沙门氏菌小                             生素   B1  的处理抑制     PPARγ 表达，激活        NF-κB
                                                                                                    [20]
              泡 (Salmonella-containing vesicle, SCV) 中，这为      通路，增强其抵抗结核分枝杆菌的能力 。另
              其生存提供了良好庇护环境。在沙门氏菌的入                             一方面，结核分枝杆菌也会调控                 PPARγ 表达，
              侵和定殖过程中，沙门氏菌诱导的丝状结构                              促进宿主脂质的积累并增加               PGE2  表达，为菌
                                                                                    [1]
              (Salmonella-induced filaments, SIF) 以及通过多种       体生存创造适宜的环境 。
              分泌系统分泌的效应蛋白在抑制宿主免疫反应                                 本研究将通过一系列实验证明                 T3SS  效应
              和重编程宿主代谢活动方面发挥了重要作用                      [2,5] 。  蛋白  EseJ 是杀鱼爱德华氏菌在          J774A.1  巨噬细
              为了抵抗沙门氏菌的入侵，宿主细胞则通过调                             胞模型中定殖的关键毒力因子。EseJ 通过上调
              整自身代谢或免疫途径，抵抗沙门氏菌定殖感                             J774A.1  细胞中  PPARγ 的表达，抑制促炎性炎
                                                               症反应，减少线粒体活性氧释放，缓解线粒体
              染 [6-7] 。
                   作为一种革兰氏阴性胞内寄生菌，杀鱼爱                          损伤，为杀鱼爱德华氏菌在宿主细胞内定殖创
                                                               造有利条件。
                                             [8]
              德华氏菌 (Edwardsiella piscicida)  感染多种鱼
              类，引起爱德华氏菌病，给我国水产养殖业造                             1    材料与方法
              成了严重的经济损失           [9-10] 。该菌通常寄生于巨噬
              细胞内，通过        III 型和  VI 型分泌系统 (T3/T6SS)
                                                               1.1    菌株与培养条件
              分泌毒力效应蛋白在宿主体内定殖存活。目前，
                                                                   重 组 质 粒 在 大 肠 杆 菌       (Escherichia  coli)
              已有多种      III 型分泌系统效应蛋白被鉴定出来，
                                                               DH5α λpir、SM10 λpir 和  BTH101  中构建。大肠
              如  ETAE_1586、ETAE_1757、EseJ 和     ETAE_0866
                                                               杆 菌  DH5α  λpir、 SM10  λpir 及 其 衍 生 菌 株 于
              等。其中，ETAE_0866        在保守结构域上与沙门
                                                               37°C  条件下培养于       LB  培养基或    LB  琼脂培养
              氏菌   T3SS  效应蛋白 (SseG    和  SseF) 具有部分同
                                                               基中。杀鱼爱德华氏菌及其衍生菌株于                    30°C  条
                                         [11]
              源性，导致细胞微管不稳定 。ETAE_1586                   是
                                                               件下培养于胰蛋白胨大豆肉汤或胰蛋白胨大豆
              一种丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 磷酸化的抑
                                                               琼脂中。培养基中添加适量浓度羧苄青霉素
              制剂，能够促进杀鱼爱德华氏菌在斑马鱼体内
                                                               (100 μg/mL)、多黏菌素 (16.7 μg/mL)、卡那霉素
                     [12]
              的定殖 。ETAE_1757        是一种磷酸苏氨酸裂解
                                                               (50 μg/mL)、氯霉素 (25 μg/mL)。本研究中使用
                 [13]
              酶 。与其他效应蛋白不同，EseJ 具有较大的
                                                               的菌株和质粒信息见表            1。
              分子量 (1 358 aa，146 ku)，且在其他细菌中未
              发现同源蛋白。已有研究报道，EseJ 通过下调                          1.2    细胞培养与转染
              Ⅰ型菌毛的表达来降低杀鱼爱德华氏菌对宿主                                 小 鼠 巨 噬 细 胞 细 胞 系       J774A.1  (TIB-67；
              细胞的黏附，从而抑制宿主细胞的凋亡                       [14-15] 。  ATCC，美国) 在含有      10%  胎牛血清 (Gibco，美
              此外，EseJ 还可抑制宿主细胞溶酶体的成熟，                          国) 的  Dulbecco's modified Eagle 培养基 (DMEM)
              从而促进杀鱼爱德华氏菌定殖 。                                  [ 生工生物工程       (上海) 股份有限公司         ] 中于  5%
                                          [16]
                   过氧化物酶体增殖物激活受体                 γ (PPARγ)     CO 、37°C  条件下培养。
                                                                  2
              是一种配体依赖性的            PPAR  家族核转录因子。                  J774A.1  细胞提前    1 d  接种于  24  孔培养板，
              PPARγ 广泛存在于各种组织中，尤其在脂肪细                          每孔密度约为       6×10 个细胞。将细菌与           J774A.1
                                                                                 5
              胞和巨噬细胞中。在脂肪细胞中其主要负责调                             细胞以    10∶1 的感染复数 (MOI) 感染杀鱼爱德

              https://www.china-fishery.cn                           中国水产学会主办    sponsored by China Society of Fisheries
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