Page 106 - 《中国药科大学学报》2026年第1期
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               素  1β（interleukin-1β，IL-1β）ELISA  试剂盒（欣博盛        面积折算成小鼠约为           30 mL/kg。本实验将水煎液
               生物科技有限公司）；CCK-8 细胞增殖检测试剂盒                        浓缩   1 倍后灌胃，设      20 mL/kg 和  10 mL/kg 剂量组，
               （碧云天生物科技研究所）；RNA isolator、HiScript Q             分别高于和低于临床折算剂量（15 mL/kg）。
               RT SuperMix for qPCR（南京诺唯赞生物有限公                       C57BL/6 小鼠造模     1 h 苏醒后，按序号随机
               司）；过硫酸铵（国药集团化学试剂有限公司）；                           分 为   4 组 ： 模 型 组 （ Model） 、 HGWD  低 剂 量 组
               Nrf2（1∶500），血红素加氧酶         1（heme oxygenase-1，   （HGWD-L，10 mL/kg）、HGWD     高剂量组（HGWD-H，
               HO-1，1∶300），B  淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2，        20  mL/kg） 、 阳 性 药 组 （ NBP， 120  mg/kg） ， 每 组
               Bcl-2，1∶300），BCL-2 相关蛋白      X（Bcl-2-associated  16 只。另设     16 只假手术组（Sham），仅剪开颈部皮
               X protein，Bax，1∶500），β-actin（1∶500）等抗体（英         肤并缝合。各组小鼠造模后                1 h，分别灌胃给药
               国  Abcam  公 司 ） ； 微 管 相 关 蛋 白 -2（ microtubule-   1 次，此后每天相同时间给药            1 次，连续给药      7 d，给
               associated protein 2, MAP-2）兔多克隆一抗，CY3 标         药体积均为      20 mL/kg。
                                                                        -/-
               记 的 山 羊 抗 兔 二 抗 （ 英 国  Abcam  公 司 ） ； B27、            Nrf2 小鼠造模方法同        C57BL/6 小鼠，随机分
               DMEM 培养基、胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）            为  3 组：（1）Sham  组，（2）Model 组，（3）HGWD-H     组，
               及胰蛋白酶（美国 Gibco 公司）。其他试剂均为市售                      每组   16 只。各组小鼠造模后           1 h，分别灌胃给药
               分析纯。                                             1 次，此后每天相同时间给药            1 次，连续给药      7 d，给
                1.2    仪 器                                      药体积均为      20 mL/kg。

                    BSA124S-CW  电子分析天平（赛多利斯科学仪                   2.3    神经行为评分
               器有限公司）；1100 高效液相色谱仪及                G1315A  二         于脑缺血造模后        7 d 进行神经行为评分。参考
               极管阵列检测器（美国          Agilent 公司）；KZ-Ⅲ-F   低温      Longa 等 [10]  的  5 级  4 分法进行行为学评价。评分
               高速组织研磨仪（武汉赛维尔生物科技有限公司）；                          标准为：0—正常，无明显神经损伤症状；1—不

               NanoDrop2000 超 微 量 分 光 光 度 计 、 Varioskan™        能完全伸展对侧前爪；2—向外侧转圈；3—行走时
               LUX 多功能微孔板读数仪、StepOne Plus 实时荧光                  向 对 侧 倾 倒 ； 4—不 能 自 发 行 走 ， 有 意 识 障 碍 。
               定量   PCR  仪（美国   Thermo Scientific公司）。            2.4    脑梗死范围的测定
                1.3    动 物                                           末次给药     24 h 后，每组取    8 只小鼠，快速断头
                    C57BL/6 小鼠，雄性，体重（20±2）g，由杭州医                取脑，测定重量（记录为脑湿重），切成厚约                  1 mm  冠
               学院实验动物中心提供，生产许可证号：SCXK（浙）                        状 脑 片 ， 立 刻 置 于    1%  TTC  溶 液 中 ， 37  ℃  孵 育
               2019-0002。Nrf2 基因敲除小鼠（B6/J-Nrf2em1Cd/            40 min。根据染色分离梗死区和非梗死区，分别称
               Nju，Nrf2 ）种鼠，6~8 周龄，购自南京大学南京生物                   重，并计算梗死区重量占整个脑组织的百分比。
                       -/-
               医药研究院，生产许可证号：SCXK（苏）2015-0001。                    2.5    脑含水量
               所有动物实验均符合动物伦理委员会标准。                                   TTC  染色之后的脑组织，用滤纸吸干表面液
                                                                体，然后置     120 ℃  烤箱内   48 h，恒重后称重（记录为
                2    方 法
                                                                脑干重），按以下公式计算脑组织含水量：脑组织含
                2.1    MCAO  模型建立                               水量（%）=（脑湿重−脑干重）/脑湿重×100。
                    小鼠称重，舒泰        50 腹腔注射     50 mg/kg 麻醉，      2.6    脑组织氧化应激和炎症指标检测
               仰卧位固定，解剖显微镜下颈部正中切口，钝性分                                末次给药     24 h 后，每组取    8 只小鼠，取右脑半
               离出左侧颈总动脉及其分支颈外动脉、颈内动脉。                           球，液氮速冻之后，−80 ℃          冰箱保存。取冻存脑组
                            [10]
               参考文献方法 ，将尼龙线栓经颈内动脉插入至大                           织，常规制备组织匀浆，离心取上清液，按照试剂盒
               脑中动脉处并结扎固定。缝合颈部皮肤，放回原笼                           说明书，进行氧化应激（SOD、MDA、NO）及炎症因
               观察饲养。术后连续          3 d 皮下注射庆大霉素注射液               子（TNF-α，IL-1β）水平测定。
               抗菌处理。                                             2.7    SD 乳鼠皮质原代神经元细胞的分离及鉴定
                2.2    分组与给药                                         取新生    24 h 内的乳鼠，迅速取出整脑放入
                    HGWD   水煎液人用剂量为          200 mL/d，按体表       预 冷 培 养 液 中 ， 快 速 分 离 出 皮 层 并 剪 碎 ， 加 入
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