Page 38 - 《中国药科大学学报》2025年第5期
P. 38

570                      学报   Journal of China Pharmaceutical University 2025, 56(5): 566 − 571  第 56 卷
                                   1                   S7       (5.32%),木质部最低(4.52%),其中木质部与周皮、

                                                       S6
                                                       S5       韧皮部均存在显著差异(P < 0.05)。综合比较表明,
                                                       S4
                                                       S3
                                                       S2       韧皮部整体表现出更高的总皂苷积累水平。
                                                       S1
                                                                 3.3.3 总黄酮含量 根据表          1 检测结果,黄芪总黄
                                                                酮的分布特征呈现明显组织特异性差异:在过
                                   1                            65 目筛部分中,周皮总黄酮含量最高(0.638%),木
                                                                质部次之(0.463%),韧皮部最低(0.296%),其中韧
                                    1
                                                                皮部与周皮、木质部均存在非常显著差异(P < 0.01);
                     0   10   20  30   40  50  60   70          而在筛余部分,周皮总黄酮含量最高(0.876%),木
                                     t R /min
                                                                质部次之(0.370%),韧皮部最低(0.299%),其中周
               Figure 6    HPLC chromatograms of astragaloside IV in different
               root regions of Astragalus membranaceus          皮与木质部、韧皮部均存在非常显著差异(P < 0.001)。
               S1:  Periderm;  S2:  Screened  residue  of  periderm;  S3:Phloem;  值得注意的是,周皮总黄酮含量在所有检测样本中
               S4:  Screened  residue  of  phloem;  S5:  Xylem;  S6:  Screened
               residue  of  xylem;  S7:  Astragaloside  IV  standard;  Peak  1:  均占据最高值,其过筛与筛余物部分含量分别达韧
               Astragaloside IV peak
                                                                皮部的    2.1 倍与  2.9 倍,该定量结果与前期黄酮类
               余部分,周皮总皂苷含量最高(5.71%),韧皮部次之                       成分显微组织化学定位分析高度吻合。


               Table 1    Content detection of different parts of Astragalus membranaceus ( x ± s,n = 3)
                           Sample                Astragaloside IV /%   Total saponins /%    Total flavonoids /%
                    Periderm(65 mesh)             0.367±0.003 ###        5.80±0.08 ##        0.638±0.014 ###
                    Phloem(65 mesh)               ND ***                 6.92±0.26 **        0.296±0.008 ***
                    Xylem(65 mesh)                ND ***                 6.67±0.20 **        0.463±0.027 **##
                    Screened residue of periderm  0.850±0.036 ###        5.71±0.25           0.876±0.039 ###
                    Screened residue of phloem    ND ***                 5.32±0.13           0.299±0.024 ***
                    Screened residue of xylem     ND ***                 4.52±0.29 *#        0.370±0.011 ***#
               *      **     ***                          #      ##     ###
                P < 0.05,  P < 0.01,  P < 0.001 vs Screened residue of periderm;  P < 0.05,  P < 0.01,   P < 0.001 vs Screened residue of phloem;
               The value marked as “ND” in this table is below the limit of detection (LOD), which is set at 57.5 μg/mL. “ND” stands for “Not Detected”

                4    讨 论                                             从细胞结构层面分析染色结果,木薄壁细胞、
                                                                韧皮薄壁细胞、形成层及栓内层细胞构成黄芪皂苷
                    本研究通过优化黄芪显微组织化学定位方法,
                                                                显色区域,均属于细胞壁未加厚的组织类型,木纤
               快速直观地显示不同类型化合物在黄芪根中的分
                                                                维、木质部导管、韧皮部纤维以及木栓层细胞构成
               布,并通过定量检测进一步验证其分布差异。氢氧
                                                                黄芪黄酮显色区域,均属于次生壁加厚细胞类型 。
                                                                                                          [13]
               化钠染色法是中药材黄酮显微组织化学定位研究
                                                                黄酮染色和皂苷染色呈相反的模式。这种分布差
               中的常用方法,如朱新焰等             [11]  对紫金龙黄酮、滕红
                                                                异可能与细胞功能分化及次生代谢途径密切相关:
               梅等 对黄芪黄酮的研究均采用了此方法。然而,
                   [8]
                                                                次生壁加厚细胞(如纤维和导管)作为植物结构支
               在显色过程中,中药材自身颜色可能对染色结果造                           撑组织,可能通过富集黄酮类抗氧化成分抵御外界
               成干扰。鉴于此,本研究引入了水合氯醛透化步                            胁迫;而细胞壁未加厚的薄壁组织(如韧皮薄壁细
               骤,并采用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠染色法替代                          胞和形成层)作为物质合成与储存的主要区域,更
               氢氧化钠染色法,通过络合反应增强显色特异性,                           利于皂苷类成分的积累。二者的差异化分布体现
               使组织间的黄酮分布情况更清晰。显色方法优化                            了黄芪在长期进化中形成的次生代谢产物空间分

               后,未染色部分呈透明状,有效排除了黄芪自身颜                           配策略,可能与其生长发育(如细胞壁加厚进程)及
               色的干扰,相较于氢氧化钠法染色黄芪黄酮 ,实现                          生理功能(如防御反应、物质运输)直接相关。
                                                     [12]
               了导管、木纤维和韧皮纤维的成功染色,并且更为                                当前关于黄芪的组织化学定位研究,主要聚焦
               清晰地呈现黄酮于组织间的分布情况。                                于探究其各营养器官中化学成分的分布情况,研究
   33   34   35   36   37   38   39   40   41   42   43