Page 36 - 《中国药科大学学报》2025年第5期
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               本，将样本依次置于          5%NaNO 溶液、10%Al(NO )          mL，混合均匀后，于         60 ℃  水浴反应    15 min。反应
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                                                          3 3
               溶液各浸泡      10 min，擦干表面试液，置于载玻片上，                 结束后，立即置于冰水浴中            2 min 终止反应，随后加
               滴加   10%NaOH  溶液显色，于显微镜下观察并拍照。                   入冰乙酸      5 mL。采用紫外-可见分光光度计，于
                2.2.3 水合氯醛透化结合亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化                      532 nm  波长处测定溶液的吸收度。
               钠法染色 水合氯醛作为一种良好的透明剂，能够                            2.3.4 总黄酮含量检测 量取 “2.3.2”项提取浓缩
               溶解细胞内的淀粉粒、蛋白质、脂肪等物质，增加细                          液  2 mL，以芦丁为标准品进行总黄酮含量检测。
               胞膜和细胞壁的通透性 ，常用于中药材粉末鉴                            将所取提取浓缩液置于             60 ℃  水浴中挥干，加入
                                     [10]
               定。为此引入水合氯醛透化步骤，以新鲜黄芪根为                           60%  乙 醇  2  mL  使 其 完 全 溶 解 ， 随 后 转 移 至
               材料，采用徒手切片法制备横切面样本，将其置于                           10 mL  量瓶内，加     5%NaNO 溶液     0.3 mL，振荡均
                                                                                         2
               载玻片上，滴加水合氯醛试液，于酒精灯上加热，保                          匀，室温下静置        6 min；再吸取     10%Al(NO ) 溶液
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               持微沸    10 s，重复滴加试液和加热操作，直至切片呈                    0.3  mL， 振 荡 均 匀 后 继 续 静 置    6  min； 接 着 加 入
               透明状，置于显微镜下观察并拍照。最后，将透化                           4%NaOH   溶液  4 mL，振荡均匀，室温下静置           15 min；
               后的切片，按“2.2.2”项染色流程操作，置于显微镜                       最后用    60%  乙醇定容至      10 mL  刻度线，摇匀。采
               下观察并拍照。                                          用紫外-可见分光光度计，于             510 nm  波长处测定溶
                2.3    黄芪不同部位含量检测                               液的吸收度。
                2.3.1 组织分离 取新鲜黄芪，用刀纵向切口，将                        2.3.5 统计学分析 每组均平行测定              3 次，检测值
               中心木质部和韧皮部分离，剥离木质部，再将周皮                           以  x± s表示。采用 Excel 软件对数据进行双尾                t
               和韧皮部分离，分别剪成小段，50 ℃               烘干至恒重后          检验，P<0. 05 表示有统计学意义上的显著差异，
               粉碎，过    65 目筛。检测黄芪各部位的过筛部分和                      P <0.001 为非常显著差异。利用 GraphPad5. 01 软
               筛余部分总皂苷、总黄酮以及黄芪甲苷含量。                             件进行图表绘制。
                2.3.2 黄芪甲苷含量检测 参考             2020 年版《中华
                                                                 3    结 果
               人民共和国药典》 制备供试液和标准品溶液，采
                                [5]
               用 高 效 液 相 色 谱 法 进 行 检 测 （ high-performance        3.1    皂苷显微组织化学定位
               liquid  chromatography,  HPLC） 。 色 谱 条 件 ： 采 用        5%  香草醛-冰乙酸和高氯酸等量混合液对黄
               Agilent TC C （250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱；流           芪进行皂苷显微组织化学定位，结果如图                     1 所示：
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               动性为水（A）-乙腈（B），等度洗脱（32%B）；柱温                      木薄壁细胞和韧皮薄壁细胞呈特征性红色，形成
               30 ℃；流速    1 mL/min；进样量    20 μL；蒸发光散射检          层、栓内层细胞则呈深红色，各部位染色明显。根
               测器（ELSD）；载气流速           2.5 L/min；漂移管温度          据染色的结果推测皂苷于木栓层、形成层、木质薄
               105 ℃。并以信噪比为        3∶1 时，确定其为最低检测限。             壁细胞、韧皮薄壁细胞均有分布，但在栓内层和形
                2.3.3 总皂苷含量检测 量取 “2.3.2”项提取液                    成层更为丰富。
               200 μL，以黄芪甲苷为标准品进行总皂苷含量检测；                        3.2    黄酮显微组织化学定位
               将所取提取液置于           60 ℃  水浴中挥干，依次加入                   氢氧化钠法染色结果如图            2-A  所示，组织间黄
               5%  香草醛冰-乙酸溶液         0.2 mL  与高氯酸溶液       0.8   酮分布不清晰，缺乏清晰度和辨识度。因此，对该

                     A                          B                             C
                                         1          4b     3b                         1a        1c
                                    2                            3a
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                                3
                                                             4a
                           4            100 μm                        40 μm                        40 μm

               Figure 1    Saponin staining micrograph of Astragalus membranaceus section
               A:  Overall  micrograph  of  the  section;  B:  Magnified  view  of  the  periderm  and  phloem;  C:  Magnified  view  of  the  xylem  and  vascular
               cambium
               1:  Xylem； 2:  Vascular  cambium;  3:  Phloem； 4： Periderm； 1a:  Xylem  parenchyma  cell;  1b:  Xylem  fiber;  1c:  Vessel  element;
               3a: Phloem parenchyma cell; 3b: Phloem fiber; 4a: Phelloderm; 4b: Phellem
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