Page 35 - 《中国药科大学学报》2025年第5期
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第  56 卷第  5 期                   黄 雍，等：黄芪显微组织化学定位研究与应用                                      567

               and exclusive enrichment of astragaloside IV (0.850%). The refined histochemical localization method enables
               precise characterization of phytochemical distribution across root tissues, which can offer guidance for selective
               extraction and enrichment strategies, and comprehensively promote the utilization and development of Astragalus
               membranaceus resources.
               Key words    Astragalus membranaceus; histochemical localization; saponin; flavonoid; astragaloside IV

               This study was supported by the National Natural Science Foundation of China (No. 82374027)

                    显微组织化学定位是利用化学试剂与目标成                         司）；其他试剂均为市售分析纯。
               分反应生成有色产物或荧光信号后，通过显微镜                             1.2    仪 器
                                            [1]
               观察确定化学成分的分布情况 。该技术广泛应                                 Agilent 1 260 Infinity Ⅱ型高效液相色谱仪      (美
               用于药用植物有效化学成分分布研究，如金钗石斛                           国  Agilent 公司)；Allchrom Model 6000 型蒸发光散
               中生物碱主要分布于茎的基本组织及根的皮层薄                            射检测器（苏州全谱仪器科技有限公司）；Eclipse
               壁细胞 ；黄精中多糖类物质多分布于黏液细胞                       [3]  E100 双目光学显微镜（日本尼康株式会社）；岛津
                      [2]
               等，这些发现可为中药资源的开发利用提供指导，                           uv3600 紫外-可见分光光度计（日本岛津公司）；
               也为中药品质鉴定提供新的研究思路和方法。黄                            LE104E/02 电子天平（美国梅特勒-托利多公司）；
               芪，又名黄耆，来源于豆科植物蒙古黄芪                  Astragalus   Milli-Q  超纯水制备系统（美国        Milli-pore 公司）。

               membranaceus  (Fisch.)  Bge.var.mongholicus  (Bge.)
                                                                 2    方 法
               Hsiao 或膜荚黄芪      Astragalus membranaceus (Fisch.)
               Bge.的干燥根，性甘、微温，归脾、肺经，最早被记载                        2.1    黄芪皂苷显微组织化学定位
               于《神农本草经》，主产于内蒙古、山西、甘肃及东                               基于皂苷类成分能与          5%  香草醛-冰乙酸和高
                                                  [4]
               北地区，根中富含皂苷和黄酮类化合物 。黄芪甲                           氯酸等量混合液产生显色反应，呈现出淡红→
               苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷在               2020 年版《中华人民          红→紫红的颜色变化的特性 ，采用该混合液对黄
                                                                                          [8]
               共和国药典》中被列为评价黄芪药材质量的质量标                           芪进行皂苷显微组织化学定位。实验以新鲜黄芪
               志物 。现代研究表明，黄芪皂苷类成分具有免疫                           根为材料，采用徒手切片法制备横切面样本，将其
                   [5]
               调节、器官保护、抗病毒等多种药理活性 ；总黄酮                          置于载玻片上，滴加混合液显色处理，于显微镜下
                                                    [6]
               类成分具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、免疫调节、降血                          观察并拍照。
               糖等多种药理作用 。定向富集这两类活性成分一                            2.2    黄芪黄酮显微组织化学定位
                                [7]
               直是黄芪创新药物开发的重要方向。                                  2.2.1 氢氧化钠法染色 基于黄酮类物质能与氢
                    因此，本研究通过优化黄芪显微组织化学定位                        氧化钠水溶液发生显色反应，呈现出黄色或黄绿色
               方法，对黄芪根部皂苷和黄酮的分布进行分析，通                           的颜色变化这一特性来进行黄酮的显微组织化学
               过对不同部位的解剖分离和验证，不仅为黄芪品质                           定位 。以新鲜黄芪根为材料，采用徒手切片法制
                                                                    [8]
               鉴定提供快速便捷的方法，也为其有效成分的定性                           备横切面样本，将其置于载玻片上，滴加                   5%NaOH
               提取和富集提供参考。                                       溶液，于显微镜下观察并拍照。
                                                                 2.2.2 亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠法染色 参考黄
                1    材 料
                                                                                         [9]
                                                                酮类化合物的定量检测方法 ，尝试采用亚硝酸钠-
                1.1    试 剂                                      硝酸铝-氢氧化钠法对黄芪切片进行染色。该方法
                    新鲜黄芪（产地：内蒙古，君康芪业（固阳）科技                      通过亚硝酸钠促使黄酮类化合物的酚羟基发生亚
               有限公司）；甲醇、乙腈（色谱纯，美国                   TEDIA  公    硝化反应，随后硝酸铝与亚硝化产物结合形成黄酮-
               司）；黄芪甲苷和芦丁标准品（纯度≥98%，上海诗丹                        铝络合物，再利用氢氧化钠调节体系                 pH，使络合物
               德标准技术服务有限公司）；水合氯醛（分析纯，上                          的结构发生变化并产生明显的显色反应，实现对黄
               海远慕生物科技有限公司）；氢氧化钠、亚硝酸钠、                          芪切片中黄酮类化合物分布的精准定位。实验以
               硝酸铝，香草醛（分析纯，南京化学试剂股份有限公                          新鲜黄芪根为材料，采用徒手切片法制备横切面样
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