Page 106 - 《渔业研究》2025年第5期

第 5 期 穆志新等： 大牡蛎弧菌 S2 胶原酶基因的克隆、表达及其对菲律宾蛤仔基因表达的调控 647

马汀、2’-羟基查尔酮、氯己定、 苯扎氯铵与胶 扎氯铵、氯己定、核黄素和盐酸巴马汀与胶原酶
原酶之间的结合能分别如图所示（图 5b-h） 。2’- 之间的结合能分别为−6.6、−4.4、−3.6、−1.3 和
羟基查尔酮与胶原酶的结合能为−6.9 kcal/mol，是 −0.8 kcal/mol；原花青素与胶原酶受体的结合能最
所有受试药物中结合能最低的药物；姜黄素、苯 高，为 35.8 kcal/mol 。

a) **** b) f)
****
****
****
***
**** c) g)
****
吸光值/A570 Absorbance 0.4 d) h)
0.5
0.3
0.2
0.1
0
对照 姜黄素 核黄素 原花青素 2’-羟基查尔酮 氯已定 e)
盐酸巴马汀
苯扎氯铵

图 5 药物对胶原酶的抑制及胶原酶与药物的分子对接
Fig. 5 Inhibition of collagenase by drugs and molecular docking analysis of collagenase-drug interactions
注：a）添加药物后，胶原酶的活力测定；对照（ddH 2 O） 。b）~h） ：分子对接的最低结合能构象；b）核黄素 ；c）姜黄素 ；
d）原花青素；e）盐酸巴马汀；f）2’-羟基查尔酮；g）氯己定 ；h）苯扎氯铵。***，P<0.001；****，P<0.000 1。
Notes: a) Collagenase activity assay after drug treatment; Control (ddH 2 O). b)-h): Lowest binding energy conformation from
molecular docking; b) Riboflavin; c) Curcumin; d) Proanthocyanidins; e) Palmatine hydrochloride; f) 2’-Hydroxychalcone;
g) Chlorhexidine; h) Benzalkonium chloride. ***, P<0.001; ****, P<0.000 1。

3 讨论 等细胞骨架，以及细胞支架组成蛋白；另外亦可引
起细胞黏附相关蛋白的变化。这一现象与之前报道
胶原酶是水产病原菌中常见的毒力因子，它可
的溶藻弧菌和灿烂弧菌中胶原酶不同。在胶原酶缺失
以降解宿主的胶原蛋白等结构蛋白或细胞外基质蛋
的溶藻弧菌株 ΔcolA 中，虎斑乌贼（Sepia pharaonis）
白，从而促进病原菌对宿主的感染 [30] 。本研究首
体内的基质金属蛋白酶 19 与免疫相关通路均下
次克隆了大牡蛎弧菌 S2 胶原酶，其结构域与溶藻
调，包括 ErbB 信号通路和 JAK-STAT 信号通路下
弧菌、灿烂弧菌胶原酶不同 [25-26] ，无保守的肽酶结 调 [25] 。灿烂弧菌胶原酶可促进细胞外基质降解，
构域。但是与其他弧菌如溶珊瑚弧菌等具有同源 并下调宿主免疫功能，包括细胞凋亡、溶酶体功
性，且具有降解宿主菲律宾蛤仔胶原蛋白的能力。 能、吞噬体功能、泛素介导的蛋白水解作用以及抗
因此，初步认定大牡蛎弧菌 S2 胶原酶为一类结构 原加工呈递过程 [26] 。与溶藻弧菌和灿烂弧菌不同
新颖的胶原酶。虽然具有不同的结构，但是大牡蛎 的是，注射大牡蛎弧菌 S2 胶原酶后，菲律宾蛤仔
弧菌 S2 胶原酶与溶藻弧菌、海神弧菌和灿烂弧菌 体内表达发生显著变化的基因主要与胶原酶的降解
等致病性弧菌胶原酶同样具有致病性 [23, 25-26] ，可引 活性直接相关，表明大牡蛎弧菌 S2 胶原酶的致病
起宿主死亡，因此胶原酶为弧菌中普遍存在的致病因子。 作用主要是通过对菲律宾蛤仔体内结构蛋白的降解
菲律宾蛤仔属于无脊椎动物，仅具有先天性免 作用所产生的。例如，肌动蛋白细胞骨架调控通路
疫，其免疫过程包括细胞凋亡、Toll 样受体通路、 包含了细胞内肌动蛋白微丝的组装、解聚和动态变
补体级联反应等 [31] 。关于菲律宾蛤仔免疫的研究 化的过程；该过程受多种信号通路和蛋白因子的影
多集中于整个病原菌，如在鳗弧菌作用下菲律宾蛤 响，包括 Rho GTPases 家族、WASP 家族、整合
仔免疫相关基因的表达变化 [32] 。本研究中，注射 素、磷酸化/去磷酸化等，从而调控细胞的形态、
大牡蛎弧菌 S2 胶原酶的菲律宾蛤仔中的基因表达 运动、黏附和分裂等多种生理功能 [33] 。但是，未
变化主要集中于细胞结构蛋白，如类肌动蛋白样蛋 筛选到大牡蛎弧菌 S2 胶原酶直接调控的免疫相关
白、细胞黏附分子 DSCAM 类似物、纤维凝胶蛋白 通路。这可能是由大牡蛎弧菌 S2 胶原酶的结构与