Page 193 - 《水产学报》2026年第3期

3 期 吴海霞，等：草鱼 GCRV-II 抗原检测胶体金试剂盒研发与应用 50 卷

2.2 胶体金质量鉴定 7.0 条件下，随着抗体添加量的增加，溶液聚沉
现象消失，颜色由蓝紫色逐渐变为酒红色。当
本研究通过柠檬酸三钠还原法成功获得 20 nm
胶体金溶液，溶液呈透亮清澈酒红色，表面无漂 VP35#8 抗体 (2.6 mg/mL) 添加量为 0.8 μL 时，OD 520
为 0.942。根据此实验结果，最终选择 0.8 μL 作为
浮油状物，内部无黑色细小颗粒，裸眼鉴定为优
质胶体金 (图 3-a) 。使用紫外分光光度计测定， 抗体标记的最适添加量 (图 4-b) 。
[32]
胶体金溶液特征吸收峰位于 520 nm 附近，OD 520 2.4 GCRV-II 抗原检测试剂盒反应时间优化
为 0.821 Abs，大于 0.8 Abs 标准值，符合优质胶
随着反应时长的不断增加，每组 RSD 的误差
体金溶液的标准 (图 3-b) 。
[33]
呈现先减小后增大的趋势。在反应进行 10 min 时
2.3 抗体最佳标记条件的确定 RSD 平均值最小，数据分散程度最低，此时灰度
胶体金溶液标记抗体最适 pH 随着胶体 值趋于稳定 (图 5) 。由于反应10 min 时金标抗体
释放完全并与捕获抗体充分结合，且检测卡显色
金溶液 pH 的增加，溶液颜色由蓝紫色逐渐变为
未受时间因素干扰，故选取10 min 作为最佳反应
酒红色，且不同 pH 条件下胶体金溶液 OD 52 0 存在
较大差异。当溶液 pH 值为 7.0 时溶液呈鲜艳酒红 时长。
色，OD 52 0 最高为 0.821 (图 4-a) 。因此，VP3#8 2.5 试剂盒灵敏度
抗体最佳标记 pH 为 7.0。 根据“GCRV-II 抗原检测试剂盒性能测试”灵
胶体金溶液标记抗体最适添加量 在 pH
敏度检测方法判断抗原检测试剂盒的灵敏度。实
倍稀释组与 倍稀释组
验结果显示，原液组、2 4
T 线均呈现条带。当稀释倍数达到 6 倍及以上时，
T 线显色完全消失。通过 RT-qPCR 绝对定量标准
曲 线 比 对 分 析 ， 明 确 本 试 剂 盒 最 低 检 测 限 为
1.76×10 拷贝/μL (图 6) 。
2
2.6 试剂盒特异性
(a) 为探究检测试剂盒的反应特异性，本实验采
1.0 用常见鲤科 (Cyprinidae) 鱼类病毒进行平行检测，
包括 SVCV、CyHV-3 和 GCRV-I，以 PBS 缓冲液
0.8 (520, 0.821) 和健康草鱼组织匀浆液作为实验对照组。SVCV、
CyHV-3 和 GCRV-I 病毒液均无法被 GCRV-II 抗
0.6
吸光度 absorbance 0.4 原检测试剂盒检出，检测结果与健康草鱼组织匀
7) 。
浆无异 (图
2.7 试剂盒稳定性
0.2
通过加速破坏实验分析 GCRV-II 检测试剂盒
0 的稳定性。该试剂盒在 90 天加速破坏实验中，持
300 400 500 600 700 续对 GCRV-YX246、健康草鱼组织匀浆液检测结
波长/nm 果及其条带显色度进行记录。经统计分析发现，
wave length
(b) 阳性样本与阴性样本条带显色度及检测结果随时

间变化无明显差异 (图 8) 。因此，本试剂盒在
图 3 20 nm 的胶体金溶液
4~25 ℃ 阴凉避光干燥条件下可储存至少 12 个月，
(a) 20 nm 胶体金溶液，(b) 300~700 nm 波长范围内 20 nm 胶体金溶
液吸光度曲线。 具有良好的稳定性。
Fig. 3 20 nm colloidal gold solution
2.8 试剂盒的组织检测与评估
(a) 20 nm colloidal gold solution, (b) absorbance curve of 20 nm col-
loidal gold solution in the wavelength range of 300-700 nm. 为系统评价 GCRV-II 检测试剂盒对 GCRV-

中国水产学会主办 sponsored by China Society of Fisheries https://www.china-fishery.cn
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