Page 195 - 《水产学报》2026年第3期

3 期 吴海霞，等：草鱼 GCRV-II 抗原检测胶体金试剂盒研发与应用 50 卷
30 草鱼出血病的早期快速检测和诊断是减少草

鱼出血病经济损失的关键策略。目前，GCRV-II
的诊断方法主要包括组织病理学分析、病毒分离
培养、血清学检测 (如
ELISA) 、分子生物学检测
相对标准偏差/% RSD (如 其中，组织病理学分析通过观察病鱼组织切片中 。
20
[34]
RT-PCR、RT-qPCR) 以及免疫层析技术等
的特征性病理变化 (如肝脾坏死、肠上皮细胞脱落
10
等) 进行诊断，虽具有直观性优势，但存在耗时长
(通常需要 24~48 h) 、对操作人员专业技能要求高、
[35]
且难以区分相近病原体等局限性 。病毒分离培
0
5 10 15 20 25 养周期长 (一般需要 5~7 d) 、需要建立敏感细胞
反应时间/min 系，操作复杂，难以满足基层快速诊断需求；
reaction time
ELISA 方法虽可实现批量检测，但仍依赖实验室
图 5 5~25 min 不同反应时长测定 3 次灰度值 设备，且检测时间较长 (通常 4~6 h) ；RT-PCR
[36]
相对标准偏差统计结果 和 RT-qPCR 作为行业金标准，具有高灵敏度和特
Fig. 5 Statistical results of the relative standard
异性，但需专业技术人员和精密仪器，单样本检
deviation of three gray values measured with
测成本较高，假阳性检出率较高，难以在养殖场
different reaction durations from 5 min to 25 min
大规模推广和应用。相比之下，胶体金免疫层析
试纸条凭借快速 (仅需 5~15 min) 、低成本 (无需
85

25 80
y=−3.576 24x+36.463 00
20 R =0.998 24 75 模型 logistics
2
70
C t 值 C t value 15 灰度 grey level 65 方程 y=A2+(A1−A2)/(1+(x/x0)^p)
A1
30.468 83±18.181 82
10
81.904 1±2.340 92
A2
60
5 55 x0 121.364 48±40.361 91
2.123 98±0.810 77
P
50 R 平方 0.997 91
0 (COD)
0
3 4 5 6 7 8 9 10 11 0 200 400 600 800
lg(拷贝/μL) 病毒数/(拷贝/μL)
(a) virus copy number
(b)
bp M N GCRV-Ⅱ -2× -4× -6× -8×
500 N GCRV-Ⅱ -2× -4× -6× -8×
320 bp
250
100
(c) (d)

图 6 GCRV-II 抗原检测试剂盒灵敏度验证结果
(a) GCRV-II 标准曲线，(b) 不同拷贝数病毒液所对应灰度值，(c) 倍比稀释的 GCRV-II 病毒液 RT-PCR 结果，(d) GCRV-II 抗原检测试剂盒
灵敏度。M. DL2000 DNA marker，N. 阴性对照，GCRV-II. GCRV-II 病毒液，-2×. 稀释 2 倍的 GCRV-II 病毒液，-4×. 稀释 4 倍的 GCRV-II
病毒液，-6×. 稀释 6 倍的 GCRV-II 病毒液，-8×. 稀释 8 倍的 GCRV-II 病毒液。
Fig. 6 Sensitivity validation results of GCRV-II antigen rapid detection kit
(a) GCRV-II standard curve, (b) grayscale values corresponding to virus solutions with different virus copy numbers, (c) RT-PCR results of GCRV-II
virus solutions diluted by multiple ratios, (d) sensitivity of GCRV-II antigen rapid test kit. M. DL2000 DNA marker, N. negative control, GCRV-II.
GCRV-II virus solution (non dilution), -2×. diluted GCRV-II virus solution, -4×. diluted GCRV-II virus solution, -6×. diluted GCRV-II virus solution,
-8×. diluted GCRV-II virus solution.

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