Page 165 - 《水产学报》2026年第2期

2 期 水 产 学 报 50 卷

脂肪酸组成测定 采用气相色谱仪 (Agi- 股份有限公司)。测定方法按照生产厂家说明书进
lent Technologies 7890B-5977A, 美国) 分析饲料和 行。将 30 mg 肝脏样品切成小块，放入400 μL 磷
+
组织的脂肪酸组成。用氯仿-甲醇溶液 (2∶1，体 酸盐缓冲溶液 (PBS) 和 600 μL NAD /NADH 提取
积比) 提取脂质，通过与甲醇-硫酸溶液反应进行 液的匀浆。然后将肝脏匀浆在 4℃ 下 12 000 r/min
脂肪酸甲酯化。随后将所得酯转移到注射瓶中， 离心 10 min，收集上清液，采用比色法分别检测
通过气相色谱仪进行检测。采用 Sigma 标准品测 NAD 和 + NADH 的量。
定脂肪酸组成，并进行定量计算，加入 13∶0 标 肌肉质构特性测定 参考 Ma 等 [17] 的研究
准品。气相色谱条件：采用 hp DB-WAX 色谱柱 测定肌肉的熟肉率和持水率等判定肌肉的可食用
(100 m ×250 μm，0.25 μm) 作为气相色谱柱，色谱 品质。肌肉的质构特性相关指标 (硬度、黏聚性、
柱温度范围从初始温度 120℃ 到最高温度 250 ℃。 黏性、弹性、咀嚼性、胶着性、回复性和剪切力)
入口设置为加热温度 250 ℃，载气为高纯氮气， 使用质构仪 (Universal TA，上海腾拔仪器科技有
流速 1.4 mL/min，分流比为 10∶1。检测器条件包 限公司) 测定。测定时先将实验鱼背肌取下 (保持
括设置加热器温度为 250 ℃，气流速率为 400 厚度一致)，然后在 TPA 模式下使用 TA 25/1 000
mL/min，氢气流速为 40 mL/min，尾吹氮气流速 圆柱形探头测试，测试前速度 2.00 mm/s、测试速
为 25 mL/min。采用 Sigma 公司的试剂鉴定脂肪酸 度 1.00 mm/s、 测 试 后 速 度 2.00 mm/s、 压 缩 比
甲酯。这些试剂作为标准品，可依据其保留时间 75%、探头 2 次压缩间隔 2 s。
和质谱数据作为样品中精确成分鉴定的参考。建 RNA 提取及实时 PCR 定量分析 肝脏
立了校准曲线，以实现对检测到的脂肪酸高精度 总 RNA 的提取按照试剂盒说明书使用 TRIzol 试
定量。有关具体操作程序的详细说明参考Xie 等 [13] 剂 [ 宝生物工程 (大连) 有限公司 ] 提取。分别使
描述的方法。 用 分 光 光 度 计 (NanoDrop 2000 分 光 光 度 计 ，
血清抗氧化能力及脂质代谢相关指标的测 Thermo，美国) 和 1% 琼脂糖凝胶检测总 RNA 的
定 将保存于−80 ℃ 冰箱中的血清置于−20 ℃ 浓度和质量。使用 PrimeScript™ RT 试剂盒 [ 含
冰箱中解冻一晚，然后放置在 4 ℃ 冰箱，直至融 gDNase，天根生化科技 (北京) 有限公司 ] 进行反
化。总抗氧化能力 (T-AOC) 和丙二醛 (MDA)、甘 转录，在 CFX96 real-time RCR 仪 (Bio-Rad) 上进
油三酯 (TG)、总胆固醇 (T-CHO)、低密度脂蛋白 行实时定量 PCR 反应，按照 TB Green premix Ex
TM
胆固醇 (LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇 (HDL-C) Taq Ⅱ[ 宝 生 物 工 程 (大 连 ) 有 限 公 司 ] (Tli
TM
商品化检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所。 RNaseH Plus) 协议进行。实时荧光定量 PCR 过程：
测定方法按试剂盒说明书进行。 95 ℃ 30 s；95 ℃ 5 s，60 ℃ 30 s，40 个循环；72 ℃
肝细胞质 NAD /NADH 比值测定 肝细 60 s。此外，熔解曲线过程包括在 65 ℃ 下循环 5 s
+
+
胞质 NAD /NADH 比值采用 WST-8 NAD /NADH 和在 95 ℃ 下循环 1 s。本研究使用的引物序列通
+
测定试剂盒测定 (S0175，上海碧云天生物技术 过 Primer Premier 5 软件设计 (表 2)，以 β-actin 作

表 2 引物信息表
Tab. 2 Primers used for gene expression in this study
基因名称 正向引物 反向引物 编号
genes name forward primer (5' -3') reverse primer (5'-3') accession no.
Δ4fads2 CTTACTGTGCTCGGTGATT GGTCCTTGCTGAAGATGTT XM_005453697.4
Δ5/6fads2 CTGGTCATCGATCGAAAGGT GCGGCTTCAGAAACTTATGC NM_001279623.1
elovl5 GGCTTCCTCCTCCGTCTAAA GTGCAAAGGTTGGTGGGTAG XM_003440552
accα TAGCTGAAGAGGAGGGTGCAAGA AACCTCTGGATTGGCTTGAACA XM005471970
fas TCATCCAGCAGTTCACTGGCATT TGATTAGGTCCACGGCCACA GU433188
srebp1-c ACTGCCCTGAATGTGTTCAGACA TGCAGCAGAGAGACTGTATCCGA XM_005457771
aco-x1 AGTCCCACTGTGAGCTCCATCAA AGTCCCACTGTGAGCTCCATCAA KF918710
cpt-1a TTTCCAGGCCTCCTTACCCA TTGTACTGCTCATTGTCCAGCAGA XM003440552
pparα CTGATAAAGCTTCGGGCTTCCA CGCTCACACTTATCATACTCCAGCT NM001290066.1
β-actin CAGGATGCAGAAGGAGATCACA CGATCCAGACGGAGTATTTACG KJ126772.1

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