Page 220 - 《水产学报》2026年第01期

1 期 水 产 学 报 50 卷

3.5 0.7
3.0
0.6
2.5
吸光度 absorbance 2.0 OD 520 0.5

1.5
1.0 0.4
0.5 0.3

0
400 450 500 550 600 650 700 0 2 4 6 8 10 12 14 16
波长/nm 0.2 mol/L K 2 CO 3 添加量/μL
wavelength volumes of 0.2 mol/L K CO added
3
2
(a) (a)
0.85
0.80

0.75
OD 520

0.70

0.65

0.60
(b) 0 0.015 0.030 0.045 0.060 0.075 0.090
抗体浓度/(mg/mL)
图 3 胶体金溶液的表征 concentration of antibody
(a) 胶体金溶液的紫外可见光扫描图谱；(b) 目测观察结果。 (b)
Fig. 3 Characterization of the colloidal gold solution 图 4 0.2 mol/L K 2 CO 3 最适添加量和最佳
(a) UV-Vis spectrum of the colloidal gold solution; (b) visual observa- 抗体浓度的确定
tion result. (a) 不同 0.2 mol/L K 2 CO 3 添加量下胶体金的 OD 520 ；(b) 不同抗体
浓度下胶体金的 OD 520 。
2.5 OVA-CGIA-Strip 的灵敏度测试
Fig. 4 Determination of the optimal addition of
通过制备不同浓度的 OVA 标准工作液，滴 0.2 mol/L K 2 CO 3 and antibody concentration
加到试纸条上进行灵敏度测定及拟合标准曲线。 (a) OD 520 of colloidal gold with different amounts of 0.2 mol/L K 2 CO 3
图 5-a 为 T 线灰度值随着 OVA 工作液浓度变化 added; (b) OD 520 of colloidal gold at different antibody concentrations.
的曲线，当 OVA 的浓度为 0.01~20.00 µg/mL 时， 它们简单加工制成生鱼糜。将鱼糜与样品提取缓
OVA 浓度的对数值与 T 线灰度值呈线性关系，线 冲液 (含 0.05% 吐温-20 的 10 mmol/L PBS, pH 7.4)
性 方 程 为 y=7.17-2.79 lgx， R =0.98， LOD=0.20 按 1∶10(质量体积比) 充分混合均匀，让鱼糜在缓
2
µg/mL，作为抑制性 ELISA，其 IC =(3.13±0.18) 冲液中均匀分散，静置 5 min 后吸取 50 µL 滴加到
50
µg/mL。随着 OVA 反应浓度的增大，OVA-CGIA- 样品孔进行特异性检测。反应 5 min 后观察 OVA-
Strip 的 T 线颜色逐渐变浅，C 线颜色保持不变 CGIA-Strip 的 C 线和 T 线的显色情况。结果如
(图 5-b)。当 OVA 浓度为 1.00 µg/mL 时，T线仍略 图 6 所示，5 种鱼糜的测试结果均为阴性，而对
有颜色；浓度为 20.00 µg/mL 时，T 线完全消失， 照组鸡蛋 OVA、鸭蛋 OVA 均呈阳性，表明所研
因此视觉检出限 (vLOD) 为 20.00 µg/mL。 发的 OVA-CGIA-Strip 与鱼肉蛋白不发生免疫交叉
反应，与 Western blot 结果一致，特异性良好。
2.6 OVA-CGIA-Strip 特异性测试
2.7 OVA-CGIA-Strip 准确性测试
为了验证 OVA-CGIA-Strip 的特异性，选取
5 种市面上常见用于鱼糜制品生产的原料鱼，将 向 阴 性 鱼 糜 样 品 中 添 加 不 同 浓 度 的 鸡 蛋

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