Page 218 - 《水产学报》2026年第01期

1 期 水 产 学 报 50 卷

OVA-CGIA-Strip 特异性测试 选取 5 种常 本研究利用柱层析从鸡蛋清中纯化 OVA。蛋清通
见鱼糜制品的原料鱼肉：草鱼 (Ctenopharyngodon 过双水相萃取法前处理除杂后上样于 DEAE-Seph-
idella)、鲢 (Hypophthalmichthys molitrix)、蓝圆鲹 arose 阴离子交换层析柱，经流洗掉未结合的杂蛋
(Decapterus maruadsi)、尼罗罗非鱼 (Oreochromis 白后用含 0~0.20 mol/L NaCl 的 20 mmol/L Tris-HCl
niloticus) 和大西洋鳕 (Gadus morhua)，参考 Jiang (pH 7.5) 缓冲液进行线性洗脱，OVA 在约 0.12 mol/L
等 [22] 的方法取鱼肌肉，用冰水漂洗 2~3 次，擦干 NaCl 浓度开始被洗脱下来，收集图 1-a 中第 3 个
鱼肉表面水分后切碎，加盐擂溃后简单制成鱼糜。 蛋白洗脱峰进行 SDS-PAGE 分析，图中字母序列
鱼糜与样品提取缓冲液按 1∶10(质量体积比) 充分 为鉴定得到的 OVA 酶解肽段的氨基酸序列。SDS-
溶解混匀，静置 5 min 后吸取上清液 50 µL 进行检
PAGE 结果表明 (图 1-b)，OVA 在非还原状态下呈
测，同时以鸡蛋 OVA 和鸭蛋 OVA 作为阳性对照，
现分子质量约为 40 和 80 ku 的蛋白条带，推测
静置 5 min 显色后观察结果。
2.5
OVA-CGIA-Strip 准确性测试 选取 2 份 0.2
2.0
上述制备的不含蛋清的阴性鱼糜样品，向其中分
别添加不同浓度的鸡蛋 OVA 和鸭蛋 OVA，使加 A280 1.5 0.1 NaCl/(mol/L)
标 后 OVA 终 浓 度 分 别 为 1.00、 10.00 和 100.00 1.0
0.5
µg/mL，每个浓度设置 3 组平行，鱼糜与样品提 0
0
取缓冲液按 1∶10(质量体积比) 充分溶解混匀，静 0 50 100 150 200 250
置 5 min 后吸取上清液 50 µL 分别测定，并用胶体 组分/(3 mL/管)
fraction
金试纸分析仪进一步确证。加标回收率和变异系 (a)
数 (CV) 计算公式： M 1 2
加标量 ku
加标回收率(%) = ×100%
实际检测值 180
130
100
SD 70
55
CV(%) = ×100%
Mean 40
30
OVA-CGIA-Strip 的实际应用效果 随机 25
选取 7 种市售鱼糜和 1 份不含蛋清的鱼糜样品作
为 阴 性 对 照 样 本 ， 鱼 糜 与 样 品 提 取 缓 冲 液 按 15
(b)
1∶10(质量体积比) 充分溶解，静置 5 min 后取上 强度/%
清液进行 10~100 倍稀释处理，保证最终检测浓度 intensity I S QAVHAAHA E I N E AG R
y12
100 1 275.62
处于检测线性范围内，滴加 50 µL 溶液于样品垫 1 773.90
pre[1+]
y11
上进行检测，5 min 后观察条带显色情况，并通过 1 138.56
胶体金试纸分析仪读取 T 线数值，代入标准曲线 相对丰度/% intensity 50 b4 y8 996.49
y9
y13
中推测出鱼糜样品中 OVA 的含量。 b2[2+] y3 400.22 b6 b7 859.43 b9 1 374.70 y16
101.07 303.18
636.35 707.38
915.48 1 660.81
1.4 数据分析 200 600 1 000 1 400 1 800
m/z
采用 DOSON-10 软件读取胶体金试纸条 T 线 (c)

灰度值，实验均作 3 次平行，取平均值和标准偏 图 1 OVA 的柱层析纯化及质谱鉴定
差。采用 Excel 软件进行数据分析，Origin 8.0 软 (a) OVA 的 DEAE-Sepharose 柱 层 析 纯 化 图 ； (b) OVA 的 SDS-
件绘图。图片采用 Adobe Illustrator 2022 软件标注。 PAGE 结果。M.标准蛋白；1.非还原；2.还原；(c) OVA 的肽质量
指纹图谱。
2 结果 Fig. 1 Column chromatography purification and
mass spectrometry identification of OVA
2.1 鸡蛋 OVA 的纯化 (a) DEAE-Sepharose column chromatography purification of OVA; (b)
SDS-PAGE analysis of OVA. M. molecular weight marker; 1. non-
为了获得高纯度 OVA 以制备特异性抗体， reduced; 2. reduced; (c) peptide mass fingerprinting of OVA.

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