Page 52 - 《水产学报》2025年第10期
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于莺曼，等                                                                水产学报, 2025, 49(10): 109604

              取腹部脂肪、背部一侧的肌肉立即置于−80 °C                          取 组 织 总   RNA， 使 用     FastQuant  RT  Kit  with
              中保存。取另一侧肌肉样品固定在环保型                       GD      gDNA  试 剂 盒 将   RNA  反 转 录 成   cDNA。 根 据
              固定液    (主要成分为甲醛溶液、冰醋酸和无水乙                        Jin  等  [24]  的研究设计了相关基因的特异性定量
              醇) 中，用于制备       H.E  染色切片。此外每个处理组                PCR  引物  (表  2)。内参基因选取         β-actin  和  ef1α
              取  6  尾实验鱼，使用丁香酚麻醉后置于−20 °C                      (二者  Ct 值取算术平方根作为内参)。采用                10  倍
              以供全鱼体成分分析。                                       梯度稀释法确定引物的扩增效率为                  95%~105%。

              1.4    指标的测定                                     PCR  程序：95 °C 10 min；95 °C 5 s，60 °C 15 s，
                                                               40
                                                                 个循环；绘制熔解曲线以确定引物的特异性。
                   生长及形体指标  根据实验测定的数据
                                                               mRNA  的相对表达量采用         2 −∆∆C t 法计算。

              计算大口黑鲈的增重率、肝体比、肥满度、躯
              壳比和腹脂率。                                          1.5    数据分析
                   增重率    (weight gain rate, WGR, %) = [(W  −      数 据 经   Excel 2019  软 件 处 理 后 ， 用   IBM
                                                       B2
              W )/W ] × 100%；                                  SPSS Statistics 26  软件进行分析，采用单因素方
                B1
                     B1
                   肝 体 比    (hepatosomatic  index,  HIS,  %)  =  差分析进行对照组和不同浓度             OAA  添加组组间
              (W /W ) × 100%；                                  差异显著性分析，P<0.05          表示差异显著；采用
                 I
                    B
                   肥满度    (condition factor, CF, %) = (W /L ) ×  t 检验进行对照组和        HA  组肝脏及肌肉       NAD 、
                                                       3
                                                                                                         +
                                                    B
                                                      B
              100%；                                            NADH  和  NADH/NAD 指标的组间差异显著性
                                                                                   +
                   躯 壳 比   (carcass ratio, CR, %) = (W /W ) ×  分析，P<0.05    表示差异显著。实验数据均以平
                                                   C
                                                       B
              100%;                                            均值±标准误      (mean±SE) 来表示。

                   腹 脂 率    (mesenteric  fat  index,  MFI,  %)  =
              (W /W ) × 100%；                                  2    结果
                    B
                 F
              式中，W      1  为初始体质量      (g)，W  2  为终末体质
                       B                     B
              量  (g)，W 为体质量        (g)，W 为肝脏质量         (g)，    2.1    饲料中添加    OAA  对大口黑鲈生长、体成
                                          I
                        B
              W 为躯壳重       (g)，W 为腹脂重       (g)，L 为体长          分和摄食的影响
                                  F
                                                  B
                C
              (cm)。
                                                                   与对照组相比，HA           组增重率和全鱼总脂

                   基本营养成分  每个处理组取                 6  尾实验       肪含量显著下降        (P<0.05)(图  1-a，g)。随饲料中
              鱼，使用丁香酚麻醉后置于−20 °C               以供全鱼体                添加浓度的升高，肝体比逐渐增加，但组
                                                               OAA
              成分分析。水分采用           105 °C  烘干法，采用凯氏             间 差 异 不 显 著    (P>0.05)(图  1-b)。 饲 料 中 添 加
              定氮法    (FOSS kjeltec 8200) 测定粗蛋白，采用索
                                                               OAA  显著增加大口黑鲈摄食量             (P<0.05)(图  1-f)，
              氏抽提法测定总脂肪。                                       对肥满度、躯壳比、腹脂率和全鱼粗蛋白并无

                   生化指标  葡萄糖、丙酮酸、乳酸、糖                          显著影响     (图  1-c~e，h)。
              原、柠檬酸、琥珀酸脱氢酶                (SDH)、苹果酸脱
                                                               2.2    饲料中添加    OAA  对大口黑鲈糖代谢指标
                                        +
              氢酶   (MDH)、NADH、NAD 、NEFA、TG            采用
                                                               的影响
              南京建成生物工程研究所有限公司生产的相关
              试剂盒测定。胰岛素采用上海梵态生物科技有                                 与对照组相比，OAA          添加组血糖、血清丙
              限公司生产的相关试剂盒测定。                                   酮酸、血清乳酸、血清胰岛素和肌糖原含量均

                   肝脏、肌肉组织形态  将固定在                   4%  的     无显著性差异        (P>0.05)(图  2-a~d，f)。LA  组肝
              多聚甲醛中的肝脏组织和环保型                  GD  固定液中         糖原含量显著高于对照组          (P<0.05)，而  MA  组和  HA
              的肌肉组织送往武汉塞维尔生物技术有限公司                             组无显著性差异         (P>0.05)(图  2-e)。肝脏糖代谢
              制作切片，进行         H.E、油红染色，采用尼康显                   相关基因表达结果显示，OAA               添加组丙酮酸脱
              微镜进行拍照观察组织细胞形态，统计肝脏组                             氢 酶 激 酶    1(pdk1)、 丙 酮 酸 脱 氢 酶     E1  亚 基
              织脂滴分布情况、肌纤维直径大小。                                 α1(pdhe1α) 和肝脏葡萄糖转运蛋白           2(glut2) 基因

                   实时荧光定量        PCR (RT-qPCR)  使用北            表达与对照组相比均无显著性差异                     (P>0.05)
              京艾德莱生物科技有限公司的                 TRIpure 试剂提        (图  2-g)。结果表明，饲料中添加低浓度             OAA(1%)
              https://www.china-fishery.cn                           中国水产学会主办    sponsored by China Society of Fisheries
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