Page 115 - 《中国医疗器械杂志》2025年第6期

Chinese Journal of Medical Instrumentation 2025年 第49卷 第6期

监 管 与 测 试

3.2.6 检出限（LOD）与定量限（LOQ） 20 000 y=17 837x−709.15
18 000
R =0.999 5
2
将对照溶液稀释适当倍数，按照2.1.4节的色谱 16 000
14 000
条件进样各10 μL检测，记录色谱图，计算主峰信 12 000
10 000
噪比（S/N），当 S/N≈3 时的浓度为最低检测浓 8 000
6 000
度，即检出限；当 S/N≈10 时的浓度为最低定量浓 4 000
2 000
度，即定量限。使用线性最低点的溶液，分别稀释 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
至信噪比为3和10左右，检测结果如表6所示。 图10 酶解法标准曲线图

表6 检出限与定量限结果 Fig.10 Standard curve of enzymatic hydrolysis
Tab.6 Detection limit and quantitative limit results 3.4 样品检测试验
定量限/ 检出限/
名称 S/N 按照2.2.1、2.2.2节的方法处理重组人源化胶原
(mg/mL) (mg/mL)
蛋白敷料（小试样品，蛋白浓度为0.5 mg/mL），
线性最低点的溶液 12.47 0.1 —
按照色谱条件，进样检测，记录色谱图。结果供试
线性最低点的溶液稀释两倍 2.85 — 0.05
品样品的含量在80%~120%（见表8）。
3.3 酶解法方法学研究
表8 小试样品检测结果
3.3.1 专属性 Tab.8 Test results of small samples
按照2.2.2节方法制备重组人源化胶原蛋白冻干 标准曲线法
处理 平均峰
纤维、供试品溶液和空白溶液，分别取溶液各20 μL 方法 样品批号 峰面积1 峰面积2 面积 计算含量/
注入液相色谱仪，记录色谱图（见图9）。结果：对 （ mg/mL）
照品溶液和供试品溶液在RT=21.5 min处有相同的 水解法 20230801 2 197.28 2 288.76 2 243.020 0.444
色谱峰，空白溶液在该保留时间无相同的色谱峰， 酶解法 20230801 8 211.68 8 227.99 8 219.835 0.501

且无相邻峰，表明该方法专属性良好。 按照2.2.2节的方法处理重组人源化胶原蛋白敷料

DAD1A （
中试样品），按照色谱条件，进样20 μL检测，
空白酶解|2023-10-12 16-26-34 (GMT +08-00) 20231011-研究院03-8.amx空白酶解-r002.dx
1.0蛋白酶解|2023-10-12 15-22-55 (GMT +08-00) 20231011-研究院03-8.amx1.0蛋白酶解-r002.dx
0801酶解|2023-10-12 17-29-16 (GMT +08-00) 20231011-研究院03-8.amx0801酶解-r002.dx 记录色谱图。结果供试品样品的含量在80%~120%
（ 见表9）。

表9 中试样品检测结果
响应 Tab.9 Test results of intermediate samples
标准曲线法
平均
样品批号 峰面积1 峰面积2 计算含量/
保留时间 峰面积 （ mg/mL）
图9 专属性色谱图 01230501-1 1 068.86 1 073.83 1 071.345 0.100
Fig.9 Specific chromatogram

01230501-2 1 073.42 1 054.06 1 063.740 0.099
3.3.2 特殊标准曲线
01230502-1 888.68 888.39 888.535 0.090
按照2.2.2节的方法制备对照品溶液，按照
01230502-2 1 012.23 912.50 962.365 0.094
2.1.4节的色谱条件进样各20 μL检测，记录色谱
01230503-1 1 081.44 1 109.67 1 095.555 0.101
图。以对照品溶液浓度（mg/mL）为横坐标，以峰
01230503-2 834.38 918.28 876.330 0.089
面积（A）为纵坐标绘制标准曲线（见表7）。线
01230601-1 1 061.74 912.91 987.325 0.095
2
性方程为y=17 837x−709.15，R =0.999 5（见图10），
01230601-2 981.26 963.74 972.500 0.094
在0.05~1.0 mg/mL浓度范围内线性关系良好。

表7 酶解法标准曲线结果
Tab.7 Standard curve results of enzymatic hydrolysis 4 结论
浓度/（mg/mL） 峰面积
0.050 144.530 综上所述，本文建立了高效液相色谱法检测重
0.100 1 029.925 组人源化胶原蛋白敷料中重组Ⅲ型人源化胶原蛋白
0.125 1 739.153 含量的方法。该方法前处理简单，专属性好，分离
0.250 3 725.643
0.500 8 015.850 度高，准确度高，精密度好，可以用于该类敷料中
1.000 17 209.398 重组Ⅲ型人源化胶原蛋白含量的测定。

701