Page 113 - 《中国医疗器械杂志》2025年第6期

Chinese Journal of Medical Instrumentation 2025年 第49卷 第6期

监 管 与 测 试

DAD1A
1.0蛋白酶解|2023-10-12 15-22-55 (GMT +08-00) 20231011-研究院03-8.amx1.0蛋白酶解-r002.dx
1.0蛋白加碱3-60|2023-10-12 21-40-17 (GMT +08-00) 20231011-研究院03-8.amx1.0蛋白加碱3-60-r002.dx
蛋白1.0|2023-10-12 11-12-05 (GMT +08-00) 20231011-研究院03-8.amx1.0蛋白1.0.dx
1.0蛋白加碱不加热|2023-10-12 22-42-57 (GMT +08-00) 20231011-研究院03-8.amx1.0蛋白加碱不加热-r002.dx
a

b
响应 c
d

保留时间
注：a为不做任何处理的蛋白溶液峰图；b为蛋白溶液酶解峰图；c为蛋白溶液加碱加热峰图；d为蛋白溶液加碱不加热峰图。
图2 不同前处理方法对比色谱图
Fig.2 Comparison of chromatograms from different pretreatment methods
在 1 g敷 料 中 加 入 90 μL的 透 明 质 酸 钠 酶 一半，说明敷料加入该酶反应12 h后透明质酸钠已
10 000 IU/mL），发现90 μL酶可以将敷料的黏度
（ 完全降解，且反应时间长，对蛋白无影响。100 μL
降低，使敷料变成溶液，故取蛋白溶液（浓度为 酶在反应24 h后的敷料进行液相检测，蛋白峰面积
1.0 mg/mL）酶解后进行液相检测，结果显示该酶 接近200 μL酶时的峰面积，250 μL酶在反应12 h后
的量也会对胶原蛋白产生影响（见图2b）。 的敷料进行液相检测，蛋白峰面积与200 μL酶时的
降低酶量到50、20、10 μL，考察不同酶量下 峰面积基本一致，说明该酶加入200 μL的量即可用
该酶对敷料蛋白含量的影响，发现50 μL、20 μL酶 来检测低浓度的蛋白敷料。
6.5
加入5 min后，即可快速破坏敷料黏度，而10 μL酶 5.5
破坏敷料黏度较慢，同时检测不同酶量敷料的蛋白 4.5 酶量50 μL
3.5
酶量100 μL
含量及其对应浓度的蛋白溶液的蛋白含量，对比发 响应/(10 2 mAU) 2.5 酶量200 μL
1.5
酶量250 μL
0.5
现蛋白峰面积均接近（见图3），但敷料反应12 h −0.5
−1.5
后再检测无峰，反应时间越长，蛋白在酶的作用下 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29
保留时间/min
会被全部降解。该酶可能活性较大，对蛋白含量影
图4 敷料酶解2 h色谱图
响较大。
Fig.4 Chromatogram of the dressing after 2 h enzymatic digestion
0801-50-2|DAD1A 1.0蛋白|DAD1A 0801-20-2|DAD1A 0801-10-2|DAD1A

9
8
0.1 mg/mL蛋白溶液 7 6
响应 酶量50 μL 响应/(10 2 mAU) 5 4 酶量250 μL
酶量200 μL
酶量20 μL
酶量10 μL 3 2 1 0 酶量100 μL
−2
保留时间 −1
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27
图3 不同酶量酶解敷料的色谱对比图 保留时间/min
Fig.3 Comparative chromatograms of enzymatically digested dressings 图5 敷料酶解12 h色谱图
using different enzyme contents
Fig.5 Chromatogram of the dressing after 12 h enzymatic digestion
在5 g敷料中加入另一种透明质酸钠酶（默
9

克，100 IU/mL），降低酶的活性并考察50、100、 8
7
200、250 μL酶量下对敷料蛋白含量的影响。观察 6 21.036蛋白 酶量250 μL
发现50 μL酶加入样品12 h后，仍有稠度，其他酶 响应/(10 2 mAU) 5 4 8.033 8.363 酶量200 μL
酶量100 μL
量下样品已变为液体，进行液相检测不同酶量以及 3 2 23.696 28.183
不同反应时间下蛋白的含量（见图4~图6），分析 1 0
8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29
结果发现，200 μL酶在反应12 h以及24 h后的敷料
保留时间/min
进行液相检测，两者蛋白峰面积基本一致，反应
图6 敷料酶解24 h色谱图
2 h后的样品进行液相检测，其峰面积大于12 h时的 Fig.6 Chromatogram of the dressing after 24 h enzymatic digestion
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