Page 111 - 《中国医疗器械杂志》2025年第6期

Chinese Journal of Medical Instrumentation 2025年 第49卷 第6期

监 管 与 测 试

量最丰富的蛋白质，并且其独特的三螺旋结构，使 BCE3202-1CCN电子天平（赛多利斯公司）、HH-
胶原蛋白的性质十分稳定，具有其他高分子材料望 S4水浴锅（常州国宇仪器制造有限公司）。
尘莫及的生物组织相容性、低免疫原性、对细胞的 1.2 实验试剂
支撑弹性和可降解性，被广泛地应用于美容、医 三氟乙酸（默克，TFA suitable for HPLC, ≥
疗、食品等领域 [2-9] 。 99.0% ）、乙腈（默克，suitable for HPLC, gradient
在过去的生产实践中，大量的胶原蛋白都来自 grade, ≥99.9%）、纯净水、透明质酸钠酶（华熙
动物（如猪、牛等），但动物性蛋白的抗原性始终 生物，10 000 IU/mL）、透明质酸钠酶（默克，
是一个难以克服的问题。近年来，随着基因重组、 H1136-1AMP） 、 氢 氧 化 钠 （ AR， 西 陇 科 学 ） 、
蛋白质组学等基础理论、技术手段和临床医疗探索 盐酸（AR，天津风船）。
研究的不断发展，国内外学者对重组（类）人胶原 1.3 敷料与对照品
蛋白的表达进行了广泛的研究 [10-15] 。 重组Ⅲ型人源化胶原蛋白冻干纤维（规格：4 mg/
重组人源化胶原蛋白是由DNA重组技术制备 瓶，山西锦波生物医药股份有限公司已上市产品，
的人胶原蛋白特定型别基因编码的全长或部分氨基 注册证号：国械注准20213130488）、重组人源化
[10]
酸序列片段，或是含人胶原蛋白功能片段的组合 。
胶原蛋白敷料（山西锦波生物医药股份有限公司，
它和人体的胶原蛋白属于同源物质，细胞黏附性要
小试样品，胶原蛋白浓度为0、0.05、0.1、0.125、
[16]
高于人自身的胶原蛋白 ，且生物相容性良好，不
0.25、0.5、1.0 mg/mL）、重组人源化胶原蛋白敷料
会引发非人体成分导致的不良反应，从而在人体各
（ 山西锦波生物医药股份有限公司，制备工艺一致
种组织发挥生理功能。
的中试样品，批号01230501、01230502、01230503、
以重组人源化胶原蛋白 [16-17] 为主要原料，辅以
01230601，胶原蛋白浓度为0.1 mg/mL）。
透明质酸钠（增稠剂）以及PBS缓冲液而制成的重
组人源化胶原蛋白敷料，是一种常见的医疗器械， 2 方法
可在创面表面形成保护层，起物理屏障作用。同时
2.1 色谱条件的确定
促进创面修复、预防整形切口的瘢痕形成，在医疗
2.1.1 检测波长选择
领域已得到广泛应用。目前对胶原蛋白含量的检测
将样品稀释后，在紫外200~800 nm范围内进
[18]
[18]
方法主要为凯氏定氮法 、紫外吸收法 、柱前衍
行全波长扫描，发现在214 nm处有最大特征吸收，
[19]
生化法 。定氮法测定的是总有机氮，而不只是蛋
因此将检测波长设置为214 nm （见图1）。
白质氮，无法区分胶原与非胶原蛋白，且实验时间

太长，精度差，所用试剂有腐蚀性，尤其对于含有 0.11350
透明质酸钠的敷料，其透明质酸钠 [20-24] 的含量对蛋 0.04075
白的检测存在干扰（透明质酸分子中的N-乙酰基葡 吸光度 −0.03200
萄糖胺片段也含有氮元素）；紫外吸收法操作简 −0.10475
单，但易受其他蛋白干扰；柱前衍生化法操作步骤 −0.17750
烦琐、检测周期长、衍生化反应存在局限性。故开 200 350 500 650 800
波长/nm
发一种新的快速、简单、准确的检测胶原蛋白含量
图1 紫外图谱
的方法是十分必要的。 Fig.1 UV spectrum

本文建立了一种高效液相色谱法，可用于定量 2.1.2 色谱柱选择
检测敷料中胶原蛋白的含量，其方法快速、准确、 Agilent ZORBAX Eclipse XDB 色谱柱在较宽
重复性好，可以对该类胶原蛋白以及相关产品进行 的pH值范围（pH值=6~9 ）有良好的稳定性，并可
质量控制 。 使用0.01~0.02 M 的低浓度缓冲液，获得最高的柱
[25]
1 材料 稳定性。
2.1.3 流动相选择
1.1 仪器 将三氟乙酸作为离子对试剂。流动相中的三氟
Agilent 1260 高效液相色谱仪（Agilent公司）、 乙酸通过与疏水键合相和残留的极性表面以多种模

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