Page 77 - 《中国药科大学学报》2026年第2期

第 57 卷第 2 期 吴 杰，等：Asundexian 衍生物的设计、合成及活性评价 203

(1H, t, J = 8.2 Hz, Ar-H), 6.51(1H, d, J = 8.5 Hz, Ar- 的数据用 GraphPad Prism 5 软件进行曲线拟合，计
H), 6.46(1H, d, J = 12.5 Hz, Ar-H), 5.28(2H, br.s, NH ), 算 IC 。
50
2
+
1.95(s, 3H)。LC-MS (ESI) m/z (%):212.1 [M+H] 。 1.4 体外 aPTT 和 PT 测试
化 合 物 20b 白 色 固 体 ， 0.22 g， 收 率 42%， aPTT 试剂和 CaCl 溶液在 37 ℃ 下预热。将
2
1
mp:146.8~147.9 ℃。 H NMR (600 MHz, DMSO-d ) δ: 冻干兔血浆 90 µL、不同浓度的待测化合物溶液（溶
6
10.80(1H, s, CONH), 8.78(1H, d, J = 11.5 Hz, 于 DMSO）10 µL 或溶剂（DMSO, 10 µL, 作为溶媒对
CONHNHSO ), 7.81(1H, dd, J = 8.5, 2.0 Hz, Ar-H), 照组）加入分析仪的孵育杯中，37 ℃ 孵育 3 min。然
2
7.13(1H, dd, J = 9.6, 2.0 Hz, Ar-H), 6.31~6.28(1H, m, 后，加入预热（37 ℃）的 aPTT 试剂 100 µL。将孵育
Ar-H), 5.30(2H, br.s, NH ), 3.45(2H, q, J = 7.3 Hz, 杯放入仪器的测量位置，在 37 ℃ 下再孵育 3 min。
2
SO CH ), 1.22(3H, t, J = 7.4 Hz, CH )。LC-MS (ESI) 通过加入 100 µL 预热（37 ℃）的 CaCl 溶液启动凝
2
2
3
2
m/z (%):262.1 [M+H] 。 血，记录凝血时间。在 PT 测试中，PT 试剂在 37 ℃
+
1.2.17 目标化合物的合成 由起始原料 21 制备中 下预热。将冻干兔血浆 90 µL、不同浓度的待测化
间体 31 的合成采用文献报道方法合成 。称取中 合物溶液（溶于 DMSO）10 µL 或溶剂（DMSO, 10
[19]
间体 31（0.20 g，0.44 mmol），4a~4f 或 9a~9b 或 12a~ µL, 作为溶媒对照组）加入分析仪的孵育杯中，在
2b 或 16a~6b 或 20a~20b（0.50 mmol）和 1-丙基磷 37 ℃ 下孵育 3 min。加入预热（37 ℃）的 PT 试剂
酸环酐（T P，50% 乙酸乙酯溶液）（0.56 g，0.88 mmol） 200 µL 启动凝血，记录凝血时间。将记录的凝血时
3
加入到吡啶 10 mL 中，升温至 40 ℃ 反应 3 h。反应 间用 GraphPad Prism 5 软件进行曲线拟合，计算
完毕后，将反应液倒入水 100 mL 中，用乙酸乙酯萃 EC 。
2x
取 (50 mL × 3)，有机相用饱和食盐水洗涤 (10 mL ×
2 结果与讨论
2)，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得粗品，粗品以二氯
甲烷-甲醇 （30∶1）溶液为洗脱剂，硅胶柱色谱纯化， 2.1 体外 FXIa 酶抑制活性
分离得到目标化合物。理化性质和光谱数据见补 目标化合物对 FXIa 的抑制作用测试结果如
充材料。 表 1 所示，合成的目标化合物均对 FXIa 表现出不
1.3 FXIa 酶抑制活性测试 同程度的抑制活性。在 FA 系列化合物中，基于生
采用生色底物法进行 FXIa 酶抑制活性测 物电子等排原理，将 F22 的酰胺键反转后得到 6 个
试。FXIa 的蛋白水解酶可以分解特异性底物（p- 目标化合物，其抑制活性较 F22 显著下降。其中
Glu-Pro-Arg-pNa，HCl）产生黄色的对硝基苯胺（p- FA-2 和 FA-3 抑制活性最佳，IC 分别为 36.8 和
0
5
nitroaniline，pNA），pNA 在 405 nm 波长处有特定强 37.0 nmol/L；在 FB 系列化合物中，将 F22 的酰胺键
吸收。通过检测 405 nm 处的吸光度变化来测定化 替换为磺酰胺键合成的化合物 FB-1 和 FB-2，活性
合物对 FXIa 的抑制活性。 明显降低。去除氮原子保留砜结构的化合物 FB-3，
FXIa 悬浮于 0.9% NaCl 中，浓度为 31.5 pmol/L 其活性较 FB-2 略有提升，进一步将吗啉环替换为
（ 储 存 于 −20 ℃ ） 。 所 有 待 测 试 化 合 物 和 阳 性 Table 1 In vitro FXIa inhibitory activity of compounds FA-1-FA-
对照 Asundexian 均溶解于 DMSO 中（初始浓度: 6, FB-1-FB-4, FC-1-FC-2 and FD-1-FD-2
10 mmol/L），随后用相应的缓冲液稀释至所需浓度。 Compd. FXIa IC 50 /(nmol/L) a Compd. FXIa IC 50 /(nmol/L) a
人 FXIa 和 FXIa 底物均稀释于 pH 7.4 缓冲液中 FA-1 41.9 ± 2.9 FB-3 19.9 ± 1.8
FA-2 36.8 ± 2.7 FB-4 >50
（50 mmol/L Tris/HCl、150 mmol/L NaCl、5 mmol/L
FA-3 37.0 ± 2.4 FC-1 40.7 ± 1.8
CaCl 和 2 0.01% 牛血清白蛋白），最终浓度分别
FA-4 >50 FC-2 48.4 ± 3.6
为 0.15 nmol/L 和 5 µmol/L。在 96 孔板（COSTAR FA-5 44.8 ± 3.4 FD-1 2.8 ± 0.2
3 599）中加入缓冲液（100 µL）、FXIa（15 µL）以及 FA-6 >50 FD-2 4.4 ± 0.6
样品（15 µL）或空白溶液（缓冲液），于 37 ℃ 孵 FB-1 32.7 ± 3.2 F22 4.5 ± 0.5
育 5 min。随后向孔板中加入底物（30 µL），并在 FB-2 32.3 ± 2.5 Asundexian 5.0 ± 0.4
405 nm 波长处测定反应混合物的吸光度。将记录 a The data were means from at least three independent experiments