Page 39 - 《中国药科大学学报》2026年第2期

第 57 卷第 2 期 张欣艺，等：胰脂肪酶抑制剂筛选方法的研究进展 165

1.2 荧光法 You 等 [12] 采用荧光法研究发现，麝香葡萄及其
本法基本原理为：胰脂肪酶可水解特定荧光底 葡萄籽中的多酚提取物可有效抑制胰脂肪酶活性，
物 [ 如 4-甲基伞形酮油酸酯、7-羟基-9H-（1,3-二氯-9, 其 IC 为 0 8.63 mg/mL。Qin 等 [13] 以 DDAO-ol 为荧
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9-二甲基吖啶-2-酮）（DDAO-ol）或试卤灵月桂酸酯 光底物，对藤树提取物进行了高通量筛选，评估其
等 ]，生成具有荧光的产物。通过测定加入抑制剂 对人胰脂肪酶的抑制效果；经 HPLC-TOF-MS/MS
前后体系荧光强度的变化，即可定量评估抑制剂对 鉴定，确认杨梅素和槲皮素为活性成分，其 IC 分
0
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酶活性的影响 。该方法灵敏度高、干扰相对较 别 为 （ 1.34±0.18） µmol/L 和 （ 1.53±0.10） µmol/L。
[10]
低，适用于复杂体系或多组分混合物的高通量筛 Hou 等 [14] 则以试卤灵月桂酸酯为底物，系统评估了
选；但其缺点在于荧光底物价格昂贵、信号易发生 94 种临床常用药物及 94 种中草药对胰脂肪酶的抑
猝灭，且易受样品内源性荧光干扰 。为减少干扰， 制活性，结果显示原花青素、鼠尾草酚、金松双黄
[11]
可在反应体系中加入抗猝灭剂或设置样品空白进 酮、伊维菌素、雷洛昔芬和甲苯磺酸索拉非尼具有
行校正。 显著的抑制效果。

空白对照组 抑制剂处理组

Fluorescence intensity 1 400
2 800
2 100
37 ℃ 3 500
孵育 700

激发波长340 nm 0 450 500 550 600 650 700
Wavelength/nm
发射波长450 nm
图 2 荧光法示意图
注： ：胰脂肪酶； ：底物：4-甲基伞形酮油酸酯（4-methylumbelliferyloleate，4-MUO）； ：潜在胰脂肪酶抑制剂； ：未结合小分子化合物；
：产物：4-甲基伞形酮（4-methylumbelliferone，4-MU）； ：胰脂肪酶-抑制剂复合物

2 现代新型筛选技术 载体间结合力较弱所引发的问题，诸如酶分子易脱
落、载体吸附容量有限以及批次重现性差等。
2.1 固定化胰脂肪酶法
Zeng 等 [17] 采用物理吸附固定化法将胰脂肪酶固载
通过物理吸附、化学固定或包埋等方式，本法
于羧基修饰磁性纳米颗粒，并以此为基础从甘草中
将游离胰脂肪酶固载于某种载体上，利用胰脂肪酶
筛选胰脂肪酶抑制剂。研究最终鉴定出甘草查尔
与潜在活性成分之间的特异性结合作用进行筛选；
酮 A、D 和 E 为强效抑制剂，其展现出显著的抑制
结合物经解离溶剂洗脱后，解离液通过液相色谱-串
活性。
联质谱对活性成分进行鉴定。与传统筛选法相比，
本法具有可重复使用、操作稳定性高、易于实现高 化学共价结合法借助胰脂肪酶分子表面的羧
通量等优势；然而，该方法也存在传质阻力降低反 基与载体上氨基发生缩合反应，形成稳定的酰胺键
[18]
应速率、固定化过程易引起酶活性损失，以及制备 以实现固定 ，示意图见图 3；化学交联法通常以戊
流程较为复杂等局限性 。 二醛为交联剂，使其先与载体表面的氨基反应，构
[15]
在物理吸附固定化过程中，胰脂肪酶分子借助 建出醛基功能化载体，其再与酶分子中氨基结合，
范德华力、疏水作用或静电引力等，被直接吸附并 形成席夫碱，从而完成固定 。本法具有稳定性高
[19]
固载于载体表面 。此法具备操作简便、条件温 与重复使用性好等优点，但也存在操作复杂、反应
[16]
和、对酶活性中心影响小等显著优点；但存在酶与 条件较为剧烈且耗时较长，易引起酶活性下降等问