Page 87 - 《中国药科大学学报》2026年第1期

第 57 卷第 1 期 姚深梦，等：复方仙鹤草肠炎胶囊调控胆汁酸代谢改善溃疡性结肠炎湿热证的作用 81
Ⅰ stage: Dampness-heat syndrome Ⅱ stage: Ulcerative colitis

200 g/L honey water +
a. odd-numbered days: 2.5%DSS +
−1
−1
10 mL·kg ·d distilled spirit a. 5-ASA: 200 mg·kg ·d −1
−1
−1
(Volume fraction of ethanol is 30%) b. CAPEC-L: 470 mg·kg ·d −1
−1
b. even-numbered days: c. CAPEC-H: 1 410 mg·kg ·d −1
−1
10 g·kg ·d tallow
−1
−7 Adaptive feeding 0 10 17 18 (day)
High-fat diet Sacrifice
Figure 1 Schematic diagram of establishment of ulcerative colitis (UC) model with dampness-heat syndrome in mice
DSS: Dextran sulfate sodium; 5-ASA: 5-Aminosalicylic acid; CAPEC: Compound Agrimonia pilosula enteritis capsule; CAPEC-L: Low-dose
CAPEC; CAPEC-H: High-dose CAPEC
[6]
湿热证造模期间根据文献 对小鼠进行湿热 25%B；4~8 min，25%B~35%B；8~12 min，35%B~40%
评分评价小鼠的造模情况：活动度（0—反应敏捷， B；12~18 min，40%B~55%B；18~19 min，55%B~80%
活动有力；1—活动减少，倦怠乏力）；精神状态 B； 19~20 min， 80%B~100%B； 20~23 min， 100%B。
（0—眼睛有神，好探究；1—精神不振，嗜卧欲睡）； 流速：0.3 mL/min；柱温：40 ℃；进样量：5 μL。采用
被毛（0—皮毛光亮，致密整齐；1—皮毛无光泽或耸 电喷雾离子源（ESI），负离子多反应监测（MRM）模
毛）；爪尾（0—爪尾有力；1—爪尾变软、无力）。湿 式进行检测，方法的具体参数见表 2。
热评分=活动度评分+精神状态评分+被毛评分+爪 混合标准品、混合内标（IS）溶液的配制：精确
尾评分。 称取 CA-d4、CDCA-d4、GCA-d4、TCA-d4 配制成

UC 造模开始后，根据小鼠疾病活动指数 [7] 一定浓度的溶液，混匀得到内标溶液。精确称取
评 估 小 鼠 溃 疡 性 结 肠 炎 的 严 重 程 度 ： 体 重 减 19 种胆汁酸标准品，配制成一定浓度的母液，混合
轻（0—0%~1%；1—1%~5%；2—5%~10%；3—10%~ 得到混合标准品溶液。
20%；4—超过 20%）；粪便性状（0—正常；1—软； 样品处理：将样品稀释 100 倍后加入含内标乙
2—黏 ； 3—软 、 黏 ； 4—腹 泻 ） ； 粪 便 隐 血 （ 0—无 ； 腈，涡旋 10 min，12 000 r/min 离心 10 min，取上清
1—隐血+；2—隐血++；3—隐血+++；4—严重便血）。 液，氮吹，加入 50% 甲醇-水复溶，12 000 r/min 离心
疾 病 活 动 指 数 （ disease activity index, DAI） =（ 体 15 min，取上清液进行检测。
重减轻评分+粪便性状评分+粪便隐血评分）/3。 2.6 小鼠舌、肝脏及结肠组织病理切片观察
2.3 结肠长度测量及胸腺指数、脾脏指数计算 苏木精-伊红（hematoxylin and eosin staining,
小鼠处死后取材时，测量小鼠结肠的自然长 HE）染色：将小鼠舌、肝脏、结肠组织浸泡于 4% 多
度。称量各组小鼠的胸腺、脾脏重量，胸腺/脾脏指 聚甲醛中固定，24 h 后常规石蜡包埋，切片，HE 染
数=胸腺/脾脏湿重（mg）/体质量（g）。 色，数字病理切片扫描仪或正置显微镜观察组织病
2.4 小鼠血清中 NO、IL-6、IL-1β、TNF-α 含量 理学变化。
检测 油红 O 染色：将肝脏组织制成冰冻切片，油红
小鼠摘眼球取血，室温静置 1 h，3 000 r/min、 O 染色试剂进行染色、苏木精染液复染，数字病理
4 ℃ 离心 10 min，收集上清液，按照 ELISA 试剂盒 切片扫描仪观察小鼠肝脏的脂质沉积情况。
说 明 书 方 法 对 血 清 样 品 中 IL-6、 IL-1β、 TNF-α、 2.7 实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）实验
NO 进行检测。 qRT-PCR 法检测结肠组织中 Il-6、Il-1β、Tnf-α、
2.5 UHPLC-QQQ/MS 检 测 小 鼠 胆 汁 中 胆 汁 酸 Inos 的 mRNA 表达水平；肝脏组织中的 Fxr、Shp、
含量 Srebp-1、Bsep、Cyp7a1、Cyp7b1、Cyp8b1、Cyp27a1
检 测 条 件 ： 选 用 Acquity UPLC BEH C 柱 的 mRNA 表达水平。按照试剂盒说明书，使用
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1
（2.1 mm×100mm，1.7μm）；流动相 A：0.1% 甲酸-水 Trizol 法提取组织中的总 RNA，使用逆转录试剂盒
溶液，流动相 B：乙腈；采用梯度洗脱进行色谱分离： 将提取的 RNA 逆转录成 cDNA，以 cDNA 为模板
0~0.5 min，10%B；0.5~1 min，10%B~25%B；1~4 min， 扩增目的基因，选用 β-肌动蛋白（β-actin）作为内参，