Page 62 - 《中国药科大学学报》2026年第1期
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56                        学报   Journal of China Pharmaceutical University 2026, 57(1): 54 − 59  第 57 卷

               原、伪狂犬病      gE  抗体、口蹄疫野毒、猪瘟野毒、非洲                 10 μL（血浆与工作溶液体积比            19∶1），混合均匀制
               猪瘟抗原和抗体等均为阴性。饲养于山东华红生物                           得含药血浆基质，取基质            30 μL  于  1.5 mL EP  管中，
               工程有限公司标准动物房，温度                26 ℃，湿度    60%。    加入乙腈     30 μL  和含内标乙腈工作溶液         60 μL，振荡
               所有动物实验操作均符合动物伦理委员会标准。                            混匀约    3 min，4 °C  条件下  12 000 r/min 离心  10 min，
                                                                分离得到的上清液于          LC-MS/MS   系统中进样分析。
                2    方 法
                                                                最终制得泰妙菌素质量浓度为                 2、4、10、20、50、

                2.1    仪器分析条件                                   100、200、500、1 000 ng/mL  的标准曲线样品，质量
                2.1.1 色谱条件 选用       C 分离柱（Waters，Acquity        浓度分别为 2 ng/mL（定量下限，LLOQ）、5 ng/mL（低
                                      8
                                      1
                    ®
               UPLC  BEH C ，2.1 mm×100 mm，1.7 μm）；流速：           浓度，LQC）、75 ng/mL（中浓度，MQC）、750 ng/mL
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               0.5 mL/min；柱温：40 ℃；流动相：A       相为   0.1%  甲酸-    （高浓度，HQC）的质控样品。
               水，B   相为乙腈溶液，进样量为             5 μL。梯度洗脱：          2.3.2 待测血浆样品处理和测定 取待测血浆样
               0.0~0.1  min， 20%B； 0.1~2.5  min， 90%B； 2.5  ~3.5  本  30 μL  于  1.5 mL EP  管中，加入乙腈  30 μL  和含
               min，20%B；3.5~4 min，20%B。                         内标乙腈工作液        60 μL，进行振荡混匀约        3 min，4 °C
                2.1.2 质谱条件 离子源为电喷雾离子源（ESI ），                    条件下    12 000 r/min 离心  10 min，分离上清液于洁
                                                          +
               所采用的扫描方式为多重反应检测方式（MRM），正                         净进样瓶，在      LC-MS/MS  系统中进样分析。
               离子检测方式；喷雾电压（IS）：5 500 V；喷雾气温度                     2.4    小型猪药代动力学给药与采血设计
               （TEM）：450 ℃；雾化气（GS1）：50 psi（1 psi=6.895 kPa）；         24 头小型猪就位后首先观察健康状况，将仔
               辅助加热气（GS2）：50 psi；气帘气：20 psi；用以定量                猪分组（随机分为         4 组，每组    6 头）。饲喂无抗饲
               分析的目标离子对分别为            m/z 494.600→192.300（泰     料，其间注意观察仔猪健康状况并及时做好记录。
               妙菌素），m/z 352.200→115.100（内标，美洛昔康）；               给药前禁食      12 h，给药   6 h 后开始饲喂。于给药当
               碰撞能量分别为        15 V  和  28 V。                    天早上    7 点开始根据编号称重并做好体重记录，根
                2.2    溶液配制                                     据仔猪体重计算给药量，在超净工作台内称取药物
                2.2.1 泰妙菌素储备液 需要精密称取泰妙菌素                        并用无菌水进行药剂的配制。4 组仔猪中                    1 组按
               标准品    10.00 mg，置于   10 mL  量瓶中，加入     DMSO      照  10 mg/kg 静脉注射泰妙菌素原料药；另              3 组按
               溶解并定容至刻度，摇匀，配制质量浓度为                       1.00   照  20 mg/kg 分别灌服泰妙菌素制剂一、泰妙菌素
               mg/mL  的泰妙菌素标准曲线储备液，于                2~8 ℃  冷    制剂二、泰妙菌素制剂三。于给药前和给药后
               藏条件下储存。                                          0.08、0.17、0.33、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、6、8、
                2.2.2 泰妙菌素工作溶液 泰妙菌素标准曲线工                        12、24 h 前腔静脉收集全血         3~4 mL，离心并分离血
               作溶液：将泰妙菌素储备液用乙腈逐级稀释，配制                           浆，置–70 ℃    保存，用    LC-MS/MS  法测定血浆中泰
               成  40、 80、 200、 400、 1 000、 2000、 4 000、 10 000、  妙菌素的浓度。
               20 000 ng/mL  的标准工作溶液，于        2~8 ℃  冷藏条件        2.5    数据计算
               下储存备用。泰妙菌素质控工作溶液：将泰妙菌素                                用  Graphpad  Prism  软 件 （ 美 国   GraphPad
               储备液用乙腈逐级稀释，配制成                  40、100、1 500、    Software 公司）绘制血浆药物浓度-时间曲线，用
               15 000 ng/mL  的质控工作溶液，于        2~8 ℃  冷藏条件       WinNonlin 软件（美国     Certara 公司）计算药代动力
               下储存备用。                                           学参数。采用        Graphpad Priam  软件进行统计学分
                2.2.3 内标美洛昔康储备液和工作溶液 精密称                        析。计量资料以均数±标准差（             x± s）表示。多组比较
               取 美 洛 昔 康    5.00  mg， 置 于  5  mL  量 瓶 中 ， 加 入   采用单因素方差（One-Way ANOVA）分析，当结果
               DMSO   溶解并定溶至刻度，摇匀，得到              1.00 mg/mL    显示   P<0.05，则表示组间差异对比有统计学意义。
               的内标储备液，并用乙腈逐级稀释，制备出质量浓
                                                                 3    结 果
               度为   5.00 ng/mL  的内标工作溶液。
                2.3    血浆样品的处理                                   3.1    方法学考察
                2.3.1 标准曲线和质控样品处理及测定 定量吸                         3.1.1 专属性 分别取泰妙菌素工作液和空白血浆
               取小型猪空白血浆         190 μL，加入对应浓度工作溶液               按“2.3”项下方法处理样品后进行              LC-MS/MS  分析
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