Page 78 - 《中国药科大学学报》2025年第5期

610 学报 Journal of China Pharmaceutical University 2025, 56(5): 601 − 612 第 56 卷

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标志物 Cit-H3 及 TF 水平显著升高（P<0.05，P<0.01）， 染色提示臭氧处理无论在 C57BL/6J 还是 Sr-a1 小
同时 TFPI 下调（图 6-A~图 6-C），从而导致肾组织 鼠均可募集巨噬细胞至损伤部位（图 6-J），同时臭
基质降解与炎症激活，包括 MMP9，Bax 和肾脏损 氧能够上调 Sr-a1 小鼠肾组织的 AMPK 磷酸化
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伤因子 KIM-1 水平升高，以及促炎因子 IL-1β 和 （图 6-I），但却未能逆转 NETs-TF 的清除和肾脏的
TNF-α 的大量表达（图 6-D~图 6-H）。TUNEL 荧光 炎症损伤（图 6-A~图 6-J）。这些结果表明臭氧通
分析结果同样表明，Sr-a1 小鼠肾脏中积累了更多 过 SR-A1 依赖性途径增强巨噬细胞对凋亡微粒及
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的凋亡实质细胞（图 6-J）。虽然组织中 F4/80 荧光 NETs-TF 复合物的吞噬能力。

A Kidney tissue kD B Kidney tissue kD C Kidney tissue kD

Cit-H3 18 TF 45 TFPI 32
H3 15 β-actin 42 β-actin 42
1.5 * ** *** ns 1.5 ** ** * ns 1.5 ** ** ** ns J C57BL/6J Sr-a1 -/-
Fold of control 1.0 Fold of control 1.0 Fold of control 1.0
0.5
0.5
0.5
0 0 0 Control
Control LPS+Ozone Control LPS+Ozone Control LPS+Ozone Control LPS+Ozone Control LPS+Ozone Control LPS+Ozone
LPS
LPS
LPS
LPS
LPS
LPS
C57BL/6J Sr-a1 -/- C57BL/6J Sr-a1 -/- C57BL/6J Sr-a1 -/-
D Kidney tissue kD E Kidney tissue kD F Kidney tissue kD
MMP9 92 Bax 26 KIM-1 40
β-actin 42 β-actin 42 β-actin 42
2.0 * * * ns 2.0 *** ** *** ns 1.5 ** * * ns LPS
Fold of control 1.5 Fold of control 1.5 Fold of control 1.0
1.0
1.0
0.5
0.5
0 0.5 0 0
LPS
Control LPS+Ozone Control LPS+Ozone Control LPS+Ozone Control LPS+Ozone Control LPS+Ozone Control LPS+Ozone
LPS
LPS
LPS
LPS
LPS
C57BL/6J Sr-a1 -/- C57BL/6J Sr-a1 -/- C57BL/6J Sr-a1 -/- LPS+Ozone
G Kidney tissue kD H Kidney tissue kD I Kidney tissue kD
TNF-α 30 IL-1β 22 p-AMPK 62
β-actin 18 β-actin 42 AMPK 60 TUNEL F4/80
2.0 1.5 ** ** ** ns 1.5 ns *** ns ***
** * *** ns
Fold of control 1.0 Fold of control 1.0 Fold of control 1.0
1.5
0.5
0.5
0.5
0 0 0
LPS
LPS
LPS
LPS
LPS
Control LPS+Ozone Control LPS+Ozone Control LPS+Ozone Control LPS+Ozone Control LPS+Ozone Control LPS+Ozone
LPS
C57BL/6J Sr-a1 -/- C57BL/6J Sr-a1 -/- C57BL/6J Sr-a1 -/-
Figure 6 Sr-a1 knockout abolished the ability of ozone to enhance phagocytosis of neutrophil extracellular traps (NETs) through AMPK
activation ( x ± s, n=6)
A-I: Representative immunostaining and their quantification results for Cit-H3, TF, TFPI, MMP9, Bax, KIM-1, TNF-α, IL-1β, and p-AMPK
proteins in renal tissues; J: Immunofluorescence showed macrophage recruitment in phagocytosis of apoptotic particles. Representative
images of co-staining for TUNEL (Green), F4/80 (Red), and DAPI (Blue), scale bar=50 μm
*P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001; ns: not significant

4 讨 论 性已在肾脏疾病治疗中展现出良好的疗效 。然
[13]
而，臭氧对 S-AKI 的治疗效应和及其潜在的分子机
本研究考察了医用臭氧对 S-AKI 的干预效
制等均未有报道。本课题组通过预试验确定了臭
应。研究发现，NETs 捕获的 TF -MPs 激活凝血级
氧的最佳治疗剂量（15 μg/mL，0.5 mL，i.p.）。实验
联反应，继而诱导基质金属蛋白酶和蛋白酶激活受
体的活化，最终促进肾脏实质细胞凋亡。臭氧可通 结果表明，在 LPS 诱导的 S-AKI 模型小鼠中，肾脏
过激活 AMPK/SR-A1 信号通路增强巨噬细胞对 组织 NETs 水平显著升高并引发微循环障碍；而经
NETs-TF 的吞噬清除能力，有效改善 S-AKI 相关的 臭氧治疗后，肾脏组织形态和功能均得到改善，具
肾脏损伤（图 7）。 体表现为 CR 和 BUN 水平降低、NETs 沉积减少以
臭氧由于其独特的抗炎、免疫调节及抗病毒特 及微循环功能改善（图 1，图 2）。