Page 72 - 《中国药科大学学报》2025年第5期

604 学报 Journal of China Pharmaceutical University 2025, 56(5): 601 − 612 第 56 卷

跟踪分析仪跟踪单个颗粒的布朗运动进行测量。 的 HE 染色结果显示，模型组小鼠发生肾小管扩
仪器的设置为：激光波长：488 nm；检测模式：散射 张、空泡形成、刷状缘消失、实质细胞萎缩及炎性
光；细胞温度：20 ℃。结果用 SP2 zeta view 软件 浸润等典型损伤特征，而治疗组小鼠肾脏上述病理
8.04.02 进行分析，参数为：最大面积 1 000 pixels，最 改变显著减轻（P<0.05）（图 1-L，图 1-M）。这些结
小面积 10 pixels，最小亮度 30；纳米/类别：10 nm。 果说明，臭氧可能通过减少 NETs 累积与局部微循
取部分 MPs 重悬于结合缓冲液中，与 Annexin 环障碍，有效抑制 S-AKI 导致的肾脏损伤。
V-FITC 在 4 ℃ 黑暗中孵育 30 min，标记 MPs 表面 3.2 臭氧对 NETs 诱导的肾脏炎症与缺血状态的影响
的 PS，用荧光分光光度计进行检测（520 nm）。随 实验结果显示，LPS 模型组小鼠肾脏组织中
后，将荧光标记后的 MPs 重悬于 DMEM 培养液 CitH3、NE 和 TF 的表达水平显著上调（P<0.01），而
中，并与前述预处理好的 BMDMs 细胞一起接种于 臭氧治疗组动物相应指标的表达水平则恢复到正
细胞培养皿，在 60 min 内捕获细胞的明视野照片和 常的水平（图 2-A~图 2-C），这一变化与外周血中相
荧光图像，观察 BMDMs 细胞对 MPs 的吞噬作用。 应指标的变化趋势一致，提示 NETs 在肾组织中的
另外取部分 MPs，使用 ELISA 试剂盒检测其中的 异常沉积与循环系统中 NETs 水平的升高及凝血级
TF 含量。 联反应的激活密切相关。此外，肾组织中 MMP9 的
2.10 统计分析 表达水平升高，TFPI 表达水平降低（图 2-D，图 2-E），
采用 GraphPad Prism 9 软件进行数据分析。 同时伴随着 PAR-2 和 p53 蛋白表达的上调（图 2-F，
所有数据均表示为 x± s。各组数据之间的比较采取 图 2-G），提示肾脏发生了严重的细胞应激、炎症和
单因素方差（One-Way analysis of variance）分析，结 损伤反应。上述结果表明，臭氧治疗能够有效改善
合 Student’s t 检验进行两组间比较。P<0.05 被认 肾脏内环境的稳态失衡。图 2-H 的免疫荧光同样
为差异具有统计学意义。 显示了臭氧干预能够明显降低肾组织中 NETs 的异
常积聚。这些发现表明，臭氧可能通过抑制 NETs-
3 结 果
TF 的产生和积累发挥作用，进而下调 PAR-2 的活
3.1 臭氧对 S-AKI 微循环障碍与肾损伤的影响 化程度并减少实质细胞凋亡，保护组织功能。
如图 1-A 所示，C57BL/6J 小鼠腹腔注射 LPS 3.3 臭氧对 AMPK-SR-A1 途径的影响
后肾脏体积较对照组轻度增大，表面呈现弥漫性苍 前期研究结果提示，组织中 NETs 异常积聚后
[9]
白，包膜紧张。这些特征均符合急性肾炎的典型病 依赖于巨噬细胞清除 。因此本研究进一步考察了
理变化。臭氧治疗组肾脏体积部分恢复，色泽由苍 肾脏 AMPK/SR-A1 信号通路的变化。实验结果显
白转为淡红，提示臭氧可能通过改善肾脏微循环和 示，臭氧治疗显著促进了 AMPK 的激活（P<0.01），
减轻组织水肿发挥保护作用。同时，模型组小鼠的 同时上调了 SR-A1 受体的表达水平（图 3-A，图 3-B），
血中 CR 和 BUN 水平显著升高（P<0.01，P<0.001）， 同时组织中促炎因子 IL-1β 和 TNF-α 的蛋白表达
表明 LPS 成功诱导了肾功能障碍。而臭氧显著降 水平较模型组显著降低（P<0.05，P<0.01）（图 3-C，
低以上两个指标水平（P<0.05），提示臭氧能有效保 图 3-D）。此外，肾损伤分子 KIM-1 和促凋亡蛋白
护肾功能（图 1-B，图 1-C）。 Bax 的表达量也呈现显著下调趋势（P<0.01）（图 3-E，
LPS 处理 24 h 后，模型组小鼠血浆中的 NETs 图 3-F）。上述证据表明，臭氧可能通过激活 AMPK/
标志物 MPO-DNA 和 Cit-H3 的水平显著增加，同 SR-A1 信号通路，增强巨噬细胞对 NETs-TF 的吞噬
时伴随炎症因子 IL-1β、TNF-α 和 TF 的显著升高 清除能力，从而有效缓解了 LPS 诱导的 S-AKI。
（P<0.01，P<0.001），表明 LPS 通过激活 NETs 产生 3.4 臭氧对血浆 TF-MPs 微粒的影响
触发炎症反应并启动凝血级联反应，而臭氧治疗可 经检测，从小鼠外周血中分离获得的 MPs 平
有效逆转这一病理进程（P<0.05，P<0.01）（图 1-D~ 均直径约为 100 nm （主要范围：50~200 nm），符合
图 1-I）。此外，研究发现模型组小鼠肢体微循环障 典型凋亡微粒的物理特征。动态监测显示，血浆
碍呈时间依赖性加重，臭氧治疗显著改善此类微循 MPs 浓度在建模后呈时间依赖性升高，于 12 h 达到
环异常（P<0.05）（图 1-J，图 1-K）。肾组织病理切片 峰值后出现部分回落（图 4-A~图 4-D）。