Page 70 - 《中国药科大学学报》2025年第5期

602 学报 Journal of China Pharmaceutical University 2025, 56(5): 601 − 612 第 56 卷

completely abolished, confirming the critical role of SR-A1 in this mechanism. In summary, this study
demonstrates that medical ozone promotes macrophage clearance of TF-NETs complexes through the AMPK/SR-
A1 signaling axis, exerting dual protective effects on mice through anti-inflammatory action and microcirculation
improvement, which provides novel intervention targets and therapeutic strategies for S-AKI treatment.
Key words sepsis-associated kidney injury; tissue factor-rich microparticles; neutrophil extracellular
traps; scavenger receptor-A1; medical ozone

This study was supported by the National Natural Science Foundation of China (No. 82271252, No. 81971047)

肾脏是脓毒症病理过程中最易受损的靶器官 激的方式构建 S-AKI 模型 ，重点探讨医用臭氧通
[10]
之一，临床数据显示约三分之二的脓毒性休克患者 过调控 AMPK/SR-A1 信号轴促进巨噬细胞清除
[1]
会并发急性肾损伤 。脓毒症相关肾损伤（sepsis- TF-NETs 的分子机制，为 S-AKI 的治疗提供新的理
associated AKI，S-AKI）不仅是重症患者常见的致死 论基础和治疗策略。
性并发症，更可导致长期的肾功能障碍和不良预
1 材 料
后 。目前临床主要采用抗感染治疗策略，但抗生
[2]
素的肾毒性风险和大剂量糖皮质激素的严重不良 1.1 试 剂
[3]
反应限制了其治疗效果 。因此，开发新型安全有 肌酐（serum creatinine，CR）检测试剂盒、血尿
效的治疗靶点成为当前研究的迫切需求。 素氮（blood urea nitrogen，BUN）检测试剂盒（南京建
微循环障碍是 S-AKI 发生发展的核心环节。 成生物工程研究所）；瓜氨酸组蛋白 H3（citrullinated
脓毒症状态下，血管内皮细胞损伤可释放大量微 Histone H3， Cit-H3） 、 髓 过 氧 化 物 酶 -DNA
粒（microparticles，MPs），这些颗粒表面携带磷脂 （ myeloperoxidase-DNA， MPO-DNA） 和 TF ELISA
试剂盒（江苏博深生物科技有限公司）；抗肾损伤分
酰丝氨酸（phosphatidylserine，PS），同时富含组织
因 子 （ tissue factor， TF） ， 被 称 为 TF-MPs（ TF-rich 子 1（kidney injury molecule 1，KIM-1）抗体（美国赛
默飞世尔科技公司）；LPS（美国 Sigma 公司）；抗
microparticles） 。TF-MPs 通过双重机制加重肾损伤：
[4]
Cit-H3 抗体、抗中性粒细胞弹性蛋白酶（neutrophil
首先通过激活凝血级联反应导致微血栓形成；其次
elastase，NE）抗体（英国 Abcam 公司）；抗 TF 抗体、
激活蛋白酶激活受体-2（protease-activated receptor-
抗 巨 噬 细 胞 F4/80 抗 体 和 抗 AMPK 抗 体 （ 美 国
2，PAR-2）信号通路，促进肾小管上皮细胞凋亡 。
[5]
Santa Cruz 公 司 ） ； 抗 磷 酸 化 -AMPK（ phospho-
近 年 研 究 发 现 ， 中 性 粒 细 胞 胞 外 诱 捕 网
AMPK， p-AMPK） 抗 体 （ 美 国 Abmart 公 司 ） ； 抗
（neutrophil extracellular traps，NETs）在 S-AKI 病程
PAR-2 抗体、抗白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-
中扮演关键角色。NETs 通过释放瓜氨酸化组蛋
1β）抗体和 TF 途径抑制剂（TF pathway inhibitor,
白和中性粒细胞弹性蛋白酶等成分，不仅作为内源
TFPI）抗体（武汉爱博克生物科技有限公司）；抗组
[6]
性促凝剂，更能触发强烈的炎症反应 。临床研究
蛋白 H3 抗体、 抗 Bax 抗体、抗肿瘤坏死因子 α
证实，血浆 NETs 水平与 S-AKI 患者的预后密切相 （tumour necrosis factor-alpha，TNF-α）抗体、抗基质
[7]
关 ，而经 TF 修饰的 NETs（TF-NETs）更被证实是 金 属 蛋 白 酶 （ matrix metalloproteinase， MMP） 9 抗
血栓性炎症的重要介质 。这些发现提示，靶向清 体 、 肌 动 蛋 白 （ β-actin） 抗 体 和 CoraLite Plus488
[8]
®
除 TF-NETs 可能是改善 S-AKI 微循环障碍的创新 TUNEL 凋亡检测试剂盒（武汉三鹰生物技术有限
性治疗策略。 公司)；Alexa Fluor 488 驴抗兔二抗、Alexa Fluor
本课题组前期研究首次证实，巨噬细胞可通 Cy3 驴抗小鼠二抗（美国 Jackson Immuno Research
过 A1 类清道夫受体（scavenger receptor-A1，SR-A1） 公司）；其他抗体均购自 Cell Signaling Technology
特异性识别并吞噬 NETs，而 5'-一磷酸腺苷激活的 公司；化学试剂均为市售分析纯。
蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）信 1.2 仪 器
[9]
号通路的激活可显著增强这一过程 。基于上述发 医用臭氧（臭氧/氧气混合物）发生器（德国赫尔
现，本研究通过脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺 曼设备制造有限公司）；激光散斑多普勒血流仪（英