Page 65 - 《中国药科大学学报》2025年第5期

第 56 卷第 5 期 刘 颖，等：豆蔻明通过 mTOR-ROS 轴抑制肺成纤维细胞衰老的机制 597
A B

Bleomycin (0.5 μg/mL) − + + + +
c(Cardamonin)/(μmol/L) − − 1 5 10
****
ROS 15 ****
**
ROS + /all cells/% 10
****
Hoechst 5

Merge 0
Bleomycin (0.5 μg/mL) − + + + +
100 μm c(Cardamonin)/(μmol/L) − − 1 5 10

C D
H 2 O 2 (50 μmol/L) − + + + +
c(Cardamonin)/(μmol/L) − − 1 5 10
****
****
ROS 10 ****
8

Hoechst ROS + /all cells/% 6 4

Merge 2 0
H 2 O 2 (50 μmol/L) − + + + +
100 μm c(Cardamonin)/(μmol/L) − − 1 5 10

Figure 3 Cardamonin inhibits reactive oxygen species (ROS) production in fibroblasts ( x ± s, n = 3)
A: Effects of cardamonin on bleomycin-induced ROS levels (Representative fluorescence images); B: Statistical analysis of ROS levels in
bleomycin-treated cells with cardamonin; C: Effects of cardamonin on H 2 O 2 -induced ROS levels (Representative fluorescence images);
D: Statistical analysis of ROS levels in H 2 O 2 -treated cells with cardamonin
**P<0.01, ****P<0.000 1
可同步下调两种模型中 ROS 水平。上述结果表 还是一个很关键的抗衰老靶点 。因此，本研究检
[10]
明，豆蔻明能通过靶向 ROS 稳态，实现对多途径衰 测了豆蔻明对 mTOR 信号通路的影响。Western
老的协同干预。 blot 分析显示博来霉素处理显著激活了 mTOR
3.4 豆蔻明减轻肺成纤维细胞的纤维化表型 蛋白的磷酸化，水平升高至对照组的 1.5 倍，10
为了深入研究豆蔻明通过缓解肺成纤维细胞 μmol/L 豆蔻明共处理能抑制 mTOR 过度活化，恢
衰老对于纤维化表型的影响，采用 Western blot 技 复到和对照组相当的水平（图 5）。实验结果表明豆
术检测了纤维化标志物胶原蛋白和 α-SMA 的表达 蔻明能抑制 mTOR 信号通路的活化。

水平。实验结果表明，博来霉素处理可显著上调原 3.6 豆 蔻 明 通 过 mTOR 信 号 通 路 抑 制 ROS 产
代肺成纤维细胞中胶原蛋白和 α-SMA 的表达，而 生、细胞衰老和纤维化表型
豆蔻明干预则能显著抑制这些纤维化标志物的表 为明确 mTOR 通路在豆蔻明调控 ROS 中的核
达（图 4）。这些结果表明，豆蔻明可能通过缓解肺 心作用，采用 MHY1485 激活 mTOR 信号进行功能
成纤维细胞衰老进一步缓解纤维化表型。 回复实验。在用博来霉素和豆蔻明处理的同时联
3.5 豆蔻明抑制 mTOR 信号通路的活化 合 MHY1485（5 μmol/L）共处理原代肺成纤维细胞
基于豆蔻明对 ROS 的调控，进一步探究其上 24 h，检测 mTOR 激活后对 ROS 水平、衰老和纤维
游的信号枢纽。mTOR 信号通路是调控细胞生长、 化表型的影响。DCFH-DA 荧光探针定量结果显
代谢与自噬的核心分子开关，此外 mTOR 信号通路 示，mTOR 激活后 ROS 荧光强度显著回升（图 6-A，