Page 63 - 《中国药科大学学报》2025年第5期

第 56 卷第 5 期 刘 颖，等：豆蔻明通过 mTOR-ROS 轴抑制肺成纤维细胞衰老的机制 595

损伤细胞比例约 90%，而低浓度豆蔻明处理组没有 志物 p53 和 p21 的蛋白水平，豆蔻明处理后细胞中
明显的缓解作用，中高浓度豆蔻明处理组能将 衰老标志物的蛋白水平显著下调（图 1-E，图 1-F，
DNA 损伤细胞比例显著降低至 10% 左右（图 1-C， 图 1-G）。上述结果表明，豆蔻明能缓解博来霉素诱
图 1-D）。此外，还检测了豆蔻明处理后细胞衰老标 导的 DNA 损伤型衰老。

A B ****

100 ****
Bleomycin (0.5 μg/mL) − + + + + ***
SA-β-gal positive cell/%
c(Cardamonin)/(μmol/L) − − 1 5 10 80 ****
SA-β-gal 60
50 μm 40
20
0
Bleomycin (0.5 μg/mL) − + + + +
c(Cardamonin)/(μmol/L) − − 1 5 10
C D
Bleomycin (0.5 μg/mL) − + + + +
c(Cardamonin)/(μmol/L) − − 1 5 10 ****
****
****
γ-H2AX 100
80
γ-H2AX + /all cells/% 40

DAPI 60

Merge 20 0
Bleomycin (0.5 μg/mL) − + + + +
50 μm c(Cardamonin)/(μmol/L) − − 1 5 10

E F G **
*
Bleomycin (0.5 μg/mL) − + + 2.0 ** 3
Cardamonin (10 μmol/L) − − + kD 1.5 *
p53 55 1.0 2

p21 15 Relative p53 protein level 0.5 Relative p21 protein level 1

β-actin 40 0 0
Bleomycin (0.5 μg/mL) − + + Bleomycin (0.5 μg/mL) − + +
Cardamonin (10 μmol/L) − − + Cardamonin (10 μmol/L) − − +
Figure 1 Cardamonin alleviates bleomycin-induced fibroblast senescence ( x ± s, n = 3)
A: Effects of cardamonin on the bleomycin-induced senescence phenotype in primary lung fibroblasts [Representative images of
senescence-associated β-galactosidase (SA-β-gal) staining]; B: Quantitative analysis of SA-β-gal-positive cell rate; C: Effects of
cardamonin on bleomycin-induced γ-H2AX expression (Representative immunofluorescence images); D: Statistical results of γ-H2AX-
positive cells; E: Effects of cardamonin on bleomycin-induced senescence-associated proteins p53 and p21 expression; F: Statistical
analysis of p53 protein expression; G: Statistical analysis of p21 protein expression
*P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001, ****P<0.000 1

3.2 豆蔻明缓解 H O 诱导的肺成纤维细胞衰老 应激，影响蛋白质和脂质的功能，从而导致细胞
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为了评估豆蔻明对不同应激源诱导的细胞衰 衰 老 。 采 用 与 博 来 霉 素 相 同 的 处 理 方 式 ， 用
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老是否有同样的缓解作用，进一步建立 H O 诱导 H O （50 μmol/L）处理诱导细胞衰老，同时用梯度浓
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的氧化应激细胞衰老模型。H O 通过持续产生 度豆蔻明（1，5，10 μmol/L）处理原代肺成纤维细胞
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ROS 不仅间接引发 DNA 氧化损伤，还能引起氧化 24 h。实验结果显示，H O 显著诱导细胞衰老：SA-
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