Page 61 - 《中国药科大学学报》2025年第5期
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第  56 卷第  5 期           刘 颖，等：豆蔻明通过       mTOR-ROS  轴抑制肺成纤维细胞衰老的机制                         593

               activation of the mTOR pathway reversed senescence and fibrotic phenotypes, providing reciprocal validation of
               the target mechanism. In conclusion, cardamonin mitigates cellular senescence by targeting the mTOR-ROS axis,
               offering a promising therapeutic strategy for anti-aging interventions and the treatment of idiopathic pulmonary
               fibrosis (IPF).
               Key words    cardamonin; senescence; cellular senescence; fibroblasts; mTOR signaling pathway

               This study was supported by the National Natural Science Foundation of China (No.82273934; No.82473928)


                    特发性肺纤维化（idiopathic pulmonary fibrosis,      （mechanistic target of rapamycin, mTOR）活性并降
               IPF）是一种慢性进行性肺部疾病，其发病率随着时                         低细胞中活性氧（reactive oxygen species, ROS）的水
                                                          [1]
               间推移而提高，多发于男性，且患者的预后很差 。                          平实现的。此外，免疫印迹实验结果进一步证实豆
               目前   IPF  被认为是一种主要由上皮细胞驱动的疾                      蔻明可有效缓解纤维化相关表型。本研究深化了
               病，在疾病过程中，异常激活的肺泡上皮细胞会释                           对  IPF  中“细胞衰老驱动纤维化”机制的理解，也为
               放多种介质，诱导成纤维细胞迁移、增殖并分化为                           开发靶向衰老微环境的新型抗纤维化药物奠定了
               肌成纤维细胞。这些肌成纤维细胞大量分泌细胞                            实验基础。
               外基质（extracellular matrix, ECM），导致肺组织的
                                                                 1    材 料
               重塑，最终引发肺结构的破坏 。现有治疗手段如
                                          [2]
               尼达尼布和吡非尼酮仅能延缓疾病进展，无法逆转                            1.1    试 剂
                          [3]
               肺功能恶化 。因此，深入解析               IPF  病理机制并探              豆 蔻 明 （ 纯 度    98.38%） 和   mTOR  激 活 剂
               寻新型治疗靶点已成为呼吸领域的研究焦点。                             MHY1485（ 纯 度    99.93%） [ 美 国  MedChemExpress
                    在肺纤维化过程中，肺成纤维细胞充当纤维化                        公司   ]；硫酸博来霉素（1.5~2.0 U/mg，北京索莱宝科
               过程的直接执行者，它们活化后转化为肌成纤维细                           技有限公司）；30%       过氧化氢（国药集团化学试剂有
               胞，分泌    ECM  成分。在伤口成熟/重塑阶段，肌成                    限公司）；基础       DMEM，1%    青霉素-链霉素混合液
               纤维细胞促进伤口收缩，当伤口严重、组织损伤刺                           （美国赛默飞世尔科技公司）；10%              胎牛血清（FBS，
               激物持续存在或修复过程失调时，就会发生纤维                            德国   Cegrogen Biotech 公司）；胶原酶Ⅳ型（活性≥
                 [4]
               化 。最近研究表明衰老成纤维细胞的分泌组具有                           125 U/mg，德国默克集团）；细胞衰老            β-半乳糖苷酶
               促纤维化作用，清除衰老细胞可以减轻肺纤维                             （senescence-associated β-galactosidase, SA-β-gal）染
               化 。这种“衰老-纤维化”恶性循环的分子机制尚                          色试剂盒、DNA       损伤检测试剂盒、活性氧检测试剂
                 [5]
               未完全阐明，但提示靶向调控成纤维细胞衰老可能                           盒、Hoechst 33 342 活细胞染色液和        5X SDS-PAGE
               成为   IPF  治疗的突破口。                                蛋白上样缓冲液（碧云天生物技术有限公司）；
                    豆蔻明（cardamonin）是一种存在于多种植物中                  ECL  发光液（上海圣尔生物科技有限公司）；p53、
               的黄酮类化合物，长期以来一直被认为对人类健康                           胶原蛋白、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、mTOR、
               有益。豆蔻明是豆蔻衍生的查耳酮，在癌症治疗、                           Phospho-mTOR  抗体（美国    Cell Signaling Technology
               免疫系统调节、炎症、杀死病原体、抗肿瘤、抗衰老                          公司）；p21 抗体（美国        Santa Cruz Biotechnology 公
                          [6]
               中发挥作用 。然而，豆蔻明是否具有调控成纤维                           司）；羊抗兔，羊抗鼠         HRP  标记二抗（上海易汇生物
               细胞衰老，延缓        IPF  进展的作用，目前并没有系统                科技有限公司）。
               的研究。这一科学问题的阐明，对拓展天然药物在                            1.2    仪 器
               纤维化疾病中的应用具有重要价值。                                      正倒置一体荧光显微镜（美国             ECHO  公司）；全
                    本研究通过构建博来霉素（bleomycin）或过氧                   光 谱 激 发 共 聚 焦 显 微 镜 （ 德 国        Lecia 公 司 ） ；
               化氢（H O ）诱导的原代肺成纤维细胞衰老模型，通                        多色荧光和化学发光成像仪（美国               Bio-Rad 公司）。
                      2
                        2
               过  Western blot、免疫荧光和衰老染色等技术证明                    1.3    动物和细胞
               了豆蔻明能缓解肺成纤维细胞衰老，并且其作用                                 C57BL/6 小鼠（6~8 周，雄性，SPF      级）购自上海
               机制主要是通过抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白                             灵畅生物有限公司，合格证号：SCXK（沪）2023-
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