Page 56 - 《中国药科大学学报》2025年第5期

588 学报 Journal of China Pharmaceutical University 2025, 56(5): 583 − 591 第 56 卷

进胃癌的进展。 为了探究 NSUN2 是否能够对 ARMC9 mRNA 的
3.4 NSUN2 催化 ARMC9 mRNA 发生 m C 5 甲基化 m C 5 修饰水平产生影响，本研究针对此差异修饰位
修饰 点设计引物（图 4-B），在成功验证 NSUN2 的过表
通过分析 GEO 数据库（GSE249045）NSUN2 达效率之后（P<0.001，图 4-C），使用 MeRIP-qPCR
敲 减 组 中 ARMC9 mRNA 上 不 同 修 饰 位 置 的 检测 ARMC9 mRNA 在该位点的 m C 5 修饰水平。
m C 5 评 分 情 况 ， 可 以 发 现 ARMC9 基 因 在 chr2： 结 果 显 示 ， chr2： 231291397~231291443 区 域 在
231 291 397~231 291 443 位置上的 m C 5 修饰水平在 NSUN2 高表达时存在显著性的 m C 5 富集（P<0.01，
NSUN2 低表达的情况下较其他位置更低（图 4-A）。 图 4-D）。以上结果表明，NSUN2 可以催化 ARMC9
A B C

GSE249045 DNA methylation markers Expression of ARMC9 in STAD
The different methylated genes 25 based on sample types
UBR4 RPN1 ***
EIF4G3 ARMC9 20
EGR1
ARMC9 CHRNB2
KDELR3
HSPG2 Coefficients in GC prognosis prediction RASSF2 15
1 104 10 390 PPP1R12A AKR1B1 Transcript per mlliion 10
KDM4A
UBXN8
… CCDC69 5
CEP290
−30 −20 −10 0 10 20 0
Normal Primary tumor
(n=34) (n=415)
D Expression of ARMC9 in STAD based on
individual cancer stages TCGA samples
25 ***
*** E HGC-27 MKN-28 MKN-45
Transcript per mlliion 15 ARMC9 GES-1 AGS
20
***
***
10

0 5 β-Tubulin
Normal Stage1 Stage2 Stage3 Stage4
(n=34) (n=18) (n=123) (n=169) (n=41)
TCGA samples

Figure 3 Screening of NSUN2 downstream genes
5
A: Search for m C modification level differentially expressed genes that may be regulated by NSUN2 in public datasets. (database: GEO);
B: Score of reported DNA methylation markers for predicting gastric cancer; C: Expression levels of ARMC9 in gastric cancer and normal
tissues (database:TCGA); D: Expression levels of ARMC9 in different cancer stages (database:TCGA); E: ARMC9 protein expression in
gastric cancer cell lines
***P<0.001
A B C D

NSUN2-knockdown AGS ARMC9
*** **
chr2:231374323-231374584 Primer 6 4
chr2:231344974-231345158 231 285 K 231 290 K 231 295 K 3
ARMC9 chr2:231331792-231331897 ARMC9 Relative NSUN2 mRNA expression 4 Fold enrichment/(m 5 C/IgG) 2
chr2:231296216-231296253
chr2:231291397-231291443 2 1
chr2:231226773-231226798 0 0
FLAG-NSUN2 FLAG-NSUN2
0 0.5 1.0 1.5 Vector Vector
m C score (×10 )
5
3
Figure 4 Validation of NSUN2 downstream gene ARMC9 ( x ± s, n=3)
5
A: m C score of different sites in ARMC9 mRNA in knock-down NSUN2 colorectal cancer cells; B: ARMC9 MeRIP-qPCR primer design;
5
C: Overexpression efficiency of NSUN2; D: MeRIP-qPCR validated m C modification in the special region of ARMC9
**P<0.01, ***P<0.001