Page 55 - 《中国药科大学学报》2025年第5期

第 56 卷第 5 期 李 越，等：NSUN2 通过介导 ARMC9 的 m C 5 修饰促进胃癌细胞的增殖、转移和侵袭 587

NSUN2 在胃癌组织和胃癌细胞系中表达显著升 达的 mRNA 表达效率（P<0.01，图 2-B）和蛋白表达
高，为了验证 NSUN2 在胃癌进展中是否发挥关键 水平（图 2-C），发现 NSUN2 高表达的 AGS 细胞形
作用，将过表达 NSUN2 质粒及其空载体（图 2-A） 成克隆集落的能力显著增强（P<0.05，图 2-D），迁移
分别转染到 AGS 细胞中，接着检测了 NSUN2 过表 侵袭的细胞数量显著增加（P<0.001，图 2-E）。

A B C
AGS FLAG-NSUN2
XhoI (3 233) 30 *** Vector
(920) BamHI (2 548) BamHI 3xFLAG M13 rev
2 000 4 000 6 000 20
NSUN2 NeoR ori Relative NSUN2 mRNA expression
CMV enhancer f1 ori AmpR AmpR promoter NSUN2
CMV promoter T7 promoter bGH poly(A) signal SV40 promoter SV40 poly(A) signal 10
NSUN2 pcDNA3.1-3×Flag-C 0
Vector
FLAG-NSUN2 β-actin

***
D E AGS AGS
Vector FLAG-NSUN2 10 8
AGS 6
AGS Migration Migration cell per filed (×10 3 ) 4 2
Colonies per field (×10 3 ) 2 100 μm 100 μm 0 Vector
*
3
FLAG-NSUN2
Vector 1

0
FLAG-NSUN2
Vector 10 AGS
***
FLAG-NSUN2 Invasion Invasion cell per filed (×10 3 ) 8 6
100 μm 100 μm 4 2 0 Vector

Figure 2 NSUN2 enhances the proliferation, migration and invasion of AGS cells ( x ± s, n=3) FLAG-NSUN2
A: NSUN2 overexpression plasmid; B and C: Overexpression efficiency of mRNA and protein of NSUN2; D: Effect of NSUN2 on the
proliferation of AGS cells was detected in colony-formation assays; E: Transwell assays were applied to show the cell migration and
invasion ability of AGS cells
*P<0.05, ***P<0.001

3.3 ARMC9 有可能是 NSUN2 调控的靶基因 泛素连接酶发生突变会降低 T 细胞活化阈值 [20] ；
为了进一步探究 NSUN2 促进胃癌恶性进展的 EIF4G3 基因编码真核翻译起始因子 4G3，若发生
机制，本研究基于 NSUN2 蛋白的 m C 5 甲基转移 突变会引起小鼠精子生成障碍 ，ARMC9 的 DNA
[21]
酶功能进行了下游基因的筛选。Liu 等 [19] 使用 甲基化水平可用于预测胃癌预后（图 3-B） ，因此
[22]
MeRIP-Seq 详细描绘了结直肠癌中未处理和干扰 推测 ARMC9 mRNA 的 m C 5 修饰可能与胃癌进展
NSUN2 表达后的差异 m C 5 甲基化图谱，本研究分 有关。TCGA 数据库显示，ARMC9 在胃癌组织中
析了此项目中的 GEO 数据库（GSE249045）的公共 表达上调（P<0.001，图 3-C），且随着胃癌病程进展
数据，寻找到了在对照组和 NSUN2 敲减组中存在 而上调（P<0.001，图 3-D），蛋白免疫印迹实验结果
差异，同时其 mRNA m C 5 修饰富集位点较多的基因 也显示 ARMC9 在恶性程度较高的胃癌细胞中的
（图 3-A），在自身免疫性疾病中，UBR4 基因编码的 表达显著升高（图 3-E），因此，ARMC9 可能可以促