Page 67 - 《中国药科大学学报》2025年第4期
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第  56 卷第  4 期       王呈鑫，等：基于药代动力学的甲钴胺与头孢曲松钠大鼠体内药物相互作用研究                                    463

               当日随行标准曲线回算各样品中物质浓度，并求算                           质因子，然后用       2 种样品的基质因子与各自的内标
               RSD  和  RE。                                      基质因子相比，得到经内标归一化后的基质因子。


               2.6.3 标准曲线 取“2.1”项下的工作液母液，用                      2.6.6 稳定性 取若干份大鼠空白血浆                 45 μL， 加
               50%  甲醇水溶液逐级稀释配制系列工作液。以空                         入工作液     5 μL，振荡混匀配制成质量浓度Ⅰ（甲钴
               白  SD  大鼠的血浆作为基质，按如下方法配制标准                       胺浓度为     9 ng/mL、头孢曲松钠浓度为           1.5 μg/mL）
               曲线（n=3）：取空白基质         45 μL  若干份，依次分别加           和浓度Ⅱ（甲钴胺浓度为            2 400 ng/mL、头孢曲松钠
               入工作液     5 μL，涡旋   30 s 混匀，可得到甲钴胺质量              浓度为    400 μg/mL）的含药血浆，分为         4 组，每组平
               浓度为     3 000，2 700，1 500，300，60，12，6，3 ng/mL，   行  3 份，将制备样品分别按照不同处置方法进行处
               头孢曲松钠质量浓度为 500，450，250，50，10，2，1，                置：包括在室温下放置         4 h、进样盘中（4 ℃）放置       24 h、
               0.5 μg/mL  的系列含药血浆样本，按照“2.4”项的前                  −20 ℃  冻存  14 d、低温冷冻（−20 ℃）—解冻（37 ℃）
               处理方法分别处理样品后进样分析。以所测生物                            3 次循环，处置后血浆样本按“2.4”项下方法处理后
               样品中的待测物质和内标峰面积比为                  A /A 为纵坐       进样分析，根据当日随行标准曲线对甲钴胺和头孢
                                                     s
                                                  s  i
               标，待测物质的浓度          C 为横坐标，以      1/X  为权重系       曲松钠的含量进行回算。
                                   s

               数进行线性回归，得到待测物质的标准曲线方程。                           2.7    单次给药后的药代动力学研究


               2.6.4 精密度和准确度 取若干份大鼠空白血浆                         2.7.1 给药溶液配制 精密称取甲钴胺，用生理盐
               45 μL，加入工作液      5 μL，配制甲钴胺质量浓度为            3，   水 溶 解 ， 配 制 成 质 量 浓 度 分 别 为      0.03、 0.1、 0.3
               9，120，2 400 ng/mL，头孢曲松钠质量浓度为              0.5，   mg/mL  的甲钴胺注射液。精密称取头孢曲松钠，用
               1.5，30，400 μg/mL  的含药血浆，平行        6 份，按“2.4”     生理盐水溶解，配制成质量浓度为                 30 mg/mL  的头
               项下方法分别处理后进样分析，连续测定                   3 个分析       孢曲松钠注射液。所有样品现配现用，且所有样品
               批，每个分析批间隔大于            24 h，根据每批随行血浆             在配制处理过程应避光操作。

               样品的标准曲线计算样本中的物质浓度，求算批                            2.7.2 实验方案 采用单剂量单周期给药方案，
               间、批内准确度和批间、批内精密度。                                SPF  级别的   SD  大鼠适应性饲养后随机分成             10 组，

               2.6.5 基质效应和提取回收率 取               6 份不同来源         每组   6 只，雌雄各半。均采用尾静脉注射方式给
               的大鼠空白血浆，每份血浆按如下                3 种方式进行处          药。给药前禁食不禁水           12 h。
               置：第   1 种处置方式，取若干份大鼠空白血浆                45 μL，        对 于 单 次 单 独 给 药 ： 3 组 分 别 尾 静 脉 注 射
               分别加入工作液         5 μL，振荡混匀，配制成甲钴胺血                0.03、0.1、0.3 mg/kg 的甲钴胺，命名为          MeCbl-L、
               浆终浓度分别为        9，120，2 400 ng/mL，头孢曲松钠血          MeCbl-M、MeCbl-H   组；一组尾静脉注射          90 mg/kg
               浆终浓度为      1.5，30，400 μg/mL  的含药血浆样本，按           头孢曲松钠,即为        CTX  组。对于单次联合给药，因
               “2.4”项下处理后进样分析。第            2 种处置方式，先以           两药会产生化学反应，无法同时进行尾静脉注射给
               含内标的甲醇溶液对大鼠空白血浆进行沉淀蛋白                            药，需分别考察甲钴胺对头孢曲松钠，头孢曲松钠
               处理后，再加入工作液，振荡混匀，随后按“2.4”项下                       对甲钴胺的影响。给药方案如下：3 组分别尾静脉
               方法离心、稀释处理后进样分析；第                 3 种处置方式，        注射   0.03、0.1、0.3 mg/kg 的甲钴胺后半小时联合
               用等量超纯水代替大鼠空白血浆，依前述第                     1 种处     注射   90 mg/kg 的头孢曲松钠，命名为            MeCbl-L +
               置方式，平行操作并进样分析。进样后第                   1 种处置       CTX、MeCbl-M + CTX、MeCbl-H + CTX      组；另外
               方式的样品平均峰面积与第               2 种处置方式的样品            3 组尾静脉注射       90 mg/kg 头孢曲松钠后半小时分
               平均峰面积相比，结果即为大鼠血浆中该物质的提                           别联合注射      0.03、0.1、0.3 mg/kg 的甲钴胺，命名为
               取回收率；将第       2 种处置方式的样品平均峰面积与                   CTX + MeCbl-L、CTX + MeCbl-M、CTX + MeCbl-H
               第  3 种处置方法进样后的样品平均峰面积相比，得                        组。其中     90 mg/kg 头孢曲松钠对应临床剂量            1 g/d，
               到大鼠血浆中        2 种物质的基质效应因子。同时还                   0.1 mg/kg 甲钴胺对应临床剂量         1 mg/d。
               考察了基质因子的变异系数：用第                2 种处置方式的               静脉给药后      0、5、15、30、60、120、240、360、
               样品和内标物质峰面积与第               3 种处置方式的样品            480、720 min 从大鼠眼底静脉丛采血，每次采血
               和内标峰面积做比，计算            2 种样品和内标物质的基              0.25 mL，置于含肝素的离心管中。在             8 000 r/min 的
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