Page 68 - 《中国药科大学学报》2025年第4期

464 学报 Journal of China Pharmaceutical University 2025, 56(4): 460 − 468 第 56 卷

转速下离心 5 min，收集上清血浆，按“2.4”项下方 低于定量下限的 20%；为内标响应的 0.083%，低于
法处理后进样分析，根据随行标曲进行浓度计算。 内标响应的 5%，表明甲钴胺和内标氨甲蝶呤在该
将血药浓度结果导入 Phoenix WinNonlin7.0 软件进 方法下的不受血浆中内源性成分或其他组分的影
行非房室模型拟合，求算药代动力学参数。 响，该分析方法具有良好的选择性。头孢曲松钠及

其内标头孢克肟的保留时间分别是 1.79 和 1.85
3 结 果
min, 空白基质中头孢曲松钠的响应为定量下限处

3.1 专属性和选择性 的 0.67%，低于 20%；为内标响应的 0.029%，低于
甲钴胺为内源性物质，但大鼠体内内源性甲钴 5%，表明头孢曲松钠和内标头孢克肟在该方法下的
胺含量低且不存在昼夜节律性；甲钴胺及其内标氨 不受血浆中内源性成分或其他组分的影响，该分析
甲蝶呤的保留时间分别为 1.84 和 1.78 min，空白基 方法具有良好的选择性。几种物质的特征性图谱
质中内源性甲钴胺的响应为定量下限处的 13.84%， 如图 1 和图 2 所示。

A Mecobalamin B Methotrexate (IS)

250 3.0e5
200 2.5e5
2.0e5
150
1.5e5
100
1.0e5
50 1.98 5.0e4
0.20 0.34 1.72 2.37 2.77
0 0
0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0
Time/min Time/min
C 1 807 Mecobalamin D 2.8e5 Methotrexate (IS)
2.5e5
1 500
2.0e5
1 000 1.5e5

1.0e5
500
5.0e4
Mecobalamin
0 0
0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0
Time/min Time/min
Figure 1 Characteristic chromatograms of mecobalamin and methotrexate (IS)
A: Blank plasma; B: 30 ng/mL methotrexate (IS) treated with plasma; C: 3 ng/mL (lower limit of quantification concentration) mecobalamin
treated with plasma; D: 3 ng/mL mecobalamin and 30 ng/mL methotrexate (IS) treated with plasma

3.2 定量下限 (r = 0.999 1)，线性范围为 3~3 000 ng/mL；头孢曲松
准确度和精密度分别用相对偏差 RE 和相对 钠标准曲线方程为 y = 0.042 9 x+ 0.009 3 (r = 1)，线
标准偏差 RSD 评估。根据随行标准曲线方程计算 性范围为 0.5~500 μg/mL。结果表明甲钴胺与头孢
浓度，并计算 RSD 和 RE：甲钴胺、头孢曲松钠在定 曲松钠在线性范围内线性表现良好（r>0.99），可满
量下限处的 RSD 分别为 9.64%、7.04%；RE 分别为 足在此范围内的物质含量测定要求。

−0.95%、17.54%。定量下限处 RSD 和 RE 均不超 3.4 精密度和准确度
过±20%，符合生物样本分析的相关标准。 甲钴胺和头孢曲松钠批内、批间精密度和准确

3.3 标准曲线 度如表 2 所示。在定量下限和低、中、高浓度质控
甲钴胺标准曲线方程为 y = 0.001 03 x+ 0.000 09 浓度下，甲钴胺的批内精密度为 4.75%~10.69%，批