Page 72 - 《渔业研究》2025年第5期
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第 5 期 孔维光等： Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒 VP4 兔源单克隆抗体的制备和鉴定 613
的病毒 VP4 抗原特异性荧光信号；而在健康对照 （图 4） 。以上结果表明，1D5、1F9 和 1H1 细胞
组中未检测到阳性荧光信号，证实了这些单克隆抗 株上清液具有良好的抗原特异性，可用于重组单克
体对 GCRV-Ⅱ病毒抗原有较强的特异性识别能力 隆抗体制备的候选细胞株。
a) S6 基因序列 b)
Fc 区域 S6 gene fragment 200 M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
Fc region
140
100 80 kDa
75
55
42
pTT5 30
23
6 229 bp 分子量/kDa Molecular weight 18
启动子
Promoter
Amp 抗性基因
Origin of replication Ampicillin resistance gene 10
复制起始位点
图 2 重组 VP4 蛋白表达与纯化
Fig. 2 Expression and purification of recombinant VP4 protein
注：a. 真核表达载体构建；b. 蛋白纯化；M. 蛋白质分子量标准；泳道 1. 表达上清液；泳道 2. 流穿液；泳道 3~4. 洗涤
液；泳道 5~14. 洗脱液。
Notes: a. Construction of eukaryotic expression vector; b. Protein purification; M. Protein molecular weight marker; Lane 1.
Expression supernatant; Lane 2. Flow-through fraction; Lane 3−4. Wash fractions; Lane 5−14. Elution fractions.
a) 1.0
0.8
OD 值 OD value 0.6 白兔 A Rabbit A
0.4
白兔 B Rabbit B
0.2
0
1∶2 000 1∶4 000 1∶8 000 1∶16 000 1∶32 000 1∶64 000 1∶128 000 空白对照
血清稀释度 Blank control
Dilution ratio of serum
b) ISO 白兔 A Rabbit A 白兔 B Rabbit B
DAPI
VP4
合并 Merge
图 3 第 5 次免疫白兔血清效价水平检测
Fig. 3 Fifth immunization rabbit serum titer detection
注：a. ELISA 检测。b. IF 检测；图中蓝色荧光为细胞核，红色荧光为 VP4 蛋白，比例尺为 50 µm；图 4、图 8 同此。
Notes: a. ELISA assay results. b. IF assay; Blue fluorescence indicates nuclei and red fluorescence represents VP4 protein (virus-
specific antigen), scale bar is 50 µm; It’s the same as figure 4 and figure 8.
