Page 42 - 《渔业研究》2025年第3期

第 3 期 吴隐生等： 基于 RAA-LbCas12a 技术的有毒（害）赤潮快速检测产品应用效果评估 299

49 clone_6
99 KT390032_Levanderina_fissa_clone_ZX14-3-59
82
KT39000_Levanderina_fissa_clone_KJ47-3-69
87
clone_47
99 KT390030_Levanderina_fissa_clone_ZX14-3-10
66 clone_26
63
clone_51
clone_37
KP639236_Karlodinium_veneficum_isolate_SRE*7
97
49 LC521279_Karlodinium_austral_GBOKZ88
56
70 MZ35888_Karlodinium_digitatum_strain_KdLomme01
91 clone_2
83 clone_55
clone_48
99 LC671811_Karenia_longicanalis_AmKr650
77
LC671813_Karenia_longicanalis_LAkKL298
61 clone_29
98 LC671819_Karenia_mikimotoi_KKsKm73
32 LC671819_Karenia_mikimotoi_KKsKm72
MZ593905_Prorocentrum_shikokuense_isolate_Prosh-18S-28S
99 clone_12
48 MG914045_Prorocentrum_donghaiense_isolate_SKLMP_W037
clone_11
clone_10
100 clone_13
48
KT389854_Amoebophrya sp._KJ22-0.2-1
0.1
图 5 现场赤潮水样中 ITS 克隆序列的无根系统发育树
Fig. 5 Unrooted phylogenetic trees of the microalgae-ITS sequences retrieved from the
field red tide water samples

NC 1 2 3 4 检测数据，共进行了 10 周监测，每周对海水样品
进行 1 次米氏凯伦藻、剧毒卡尔藻和短凯伦藻的检
检测线 Test line
测，共获得 30 个检测结果。结果显示，剧毒卡尔
质控线 Control line
藻的 10 次检测结果均为阴性。在米氏凯伦藻检测
中，共出现 4 次阳性。具体而言，在 4 月 26 日和
5 月 17 日，采用 RAA-LbCas12a 技术检测到米氏
凯伦藻结果呈阳性，而同期的胶体金免疫快检试纸
图 6 现场赤潮水样的 RAA-LbCas12a 检测结果
条和显微镜观察结果均为阴性，表明水体中可能存
Fig. 6 RAA-LbCas12a test results of the field red tide
在极低浓度的米氏凯伦藻。先前研究表明，RAA-
water samples
LbCas12a 对米氏凯伦藻的检测限低至 1 个/mL，而
注：NC 为阴性对照，无菌水；1 为现场赤潮样品中米
氏凯伦藻的检测；2 为现场赤潮样品中短凯伦藻的检测； 传统的显微镜观察和胶体金免疫快检试纸条的灵敏
3 为赤潮加标样品（短凯伦藻，10 个/mL）中米氏凯伦藻的 度较低，后者的最低检测浓度为 100 个/mL，难以
检测；4 为赤潮加标样品（短凯伦藻，10 个/mL）中短凯伦 月 日和 月 日的检测结
藻的检测。 检测到微量藻种。5 10 5 25
果显示，RAA-LbCas12a 与胶体金免疫快检试纸条
Notes：NC is the negative control, sterile water; 1 is the
detection of K. mikimotoi in the on-site red tide samples; 2 is the 均呈阳性，而显微镜观察未能检出米氏凯伦藻。这
detection of K. brevis in on-site red tide samples; 3 is the detection
表明 RAA-LbCas12a 技术的灵敏度较高，且能够在
of K. mikimotoi in the spiked samples of red tide (K. brevis,
目标藻种的浓度达到其检测阈值时产生可靠的信
10 cells/mL); 4 is the detection of K. brevis in the spiked
samples of red tide (K. brevis, 10 cells/mL). 号，而显微镜因灵敏度限制无法识别该水平的藻
2.2 RAA-LbCas12a 在试点区域中的应用情况 种。这进一步证明了 RAA-LbCas12a 技术在早期赤
表 2 汇总了从 2024 年 4 月 12 日至 2024 年 6 月 潮预警中的潜力。然而，6 月 14 日的检测结果显

14 日期间，在平潭桃澳底澳开展的 RAA-LbCas12a 示，RAA-LbCas12a 对米氏凯伦藻的检测为阴性，