Page 22 - 《水产学报》2026年第3期

3 期 钟照威，等：日本鳗鲡性腺细胞系高效构建及其应用 50 卷

200 μm 1 200 μm 2 200 μm 3 200 μm 4

200 μm 5 100 μm 6 200 μm 7 100 μm 8

200 μm 9 100 μm 10 200 μm 11 100 μm 12

图版 Ⅲ 日本鳗鲡精巢组织细胞原代培养及传代培养
1.日本鳗鲡精巢细胞原代培养第 5 天；2.日本鳗鲡精巢细胞原代培养第 8 天；3.日本鳗鲡精巢细胞传代培养 P1；4.日本鳗鲡精巢细胞传代
培养 P5；5.日本鳗鲡精巢细胞传代培养 P15；6.日本鳗鲡精巢细胞传代培养 P15 局部放大；7.日本鳗鲡精巢细胞传代培养 P25；8.日本鳗鲡
精巢细胞传代培养 P25 局部放大；9.日本鳗鲡精巢细胞传代培养 P50；10.日本鳗鲡精巢细胞传代培养 P50 局部放大；11.日本鳗鲡精巢细胞
传代培养 P100；12.日本鳗鲡精巢细胞传代培养 P100 局部放大。
Plate Ⅲ Primary culture and subculture of A. japonica testicular tissue cells
1. primary culture of testicular cell of A. japonica on 5 d; 2. primary culture of testicular cell of A. japonica on 8 d; 3. P1 of A. japonica testicular cell; 4.
P5 of A. japonica testicular cell; 5. P15 of A. japonica testicular cell; 6. local amplification of P15 in A. japonica testicular cell; 7. P25 of A. japonica
testicular cell; 8. local amplification of P25 in A. japonica testicular cell; 9. P50 of A. japonica testicular cell; 10. local amplification of P50 in A. japon-
ica testicular cell; 11. P100 of A. japonica testicular cell; 12. local amplification of P100 in A. japonica testicular cell.
2.2 最佳细胞生长条件 24~60 h。
FBS 浓度对日本鳗鲡性腺细胞生长至关重要，
培养温度对日本鳗鲡性腺细胞增殖有显著影
当 FBS 浓度过低或缺失时，细胞生长严重受抑，
响。在 26 ℃ 时，细胞形态良好、增殖迅速，21 ℃
几乎无增殖，而适当提高 FBS 浓度可显著促进细
时细胞增殖速率显著低于 26 ℃，而 16 和 31 ℃ 则
胞增殖。在 0%~20% FBS 浓度范围内，细胞增殖
明显不利于细胞生长 (图 1-a~b)。特别是在 31 ℃
效率与 FBS 浓度呈正相关，其中在 15% 和 20%
条件下，细胞贴附性差、增殖停滞，且贴壁细胞
FBS 浓度下，细胞增殖效果最佳，且无显著性差
易脱落，不利于传代培养。
异 (图 1-e)。
日本鳗鲡性腺细胞对不同传代比例响应显著。 日本鳗鲡性腺细胞对培养基有偏好。培养 3 d
接种后第 1 天，贴壁细胞总数与接种密度呈正相 后，细胞在 L-15 和 DMEM/F12 培养基中均能良
关；此后，除 1∶2 和 1∶3 传代组外，其他比例 好增殖，而在 M199 和 MEM 培养基中增殖几乎
组 (1∶5, 1∶10) 的细胞增殖速率相对较缓(图 1- 停滞，表明后者不适用于日本鳗鲡性腺组织细胞
c~d)；AJOTCL 的群体倍增时间为 23.50 h，AJTTCL 的培养。其中 L-15 培养基的促增殖效率显著高于
的 群 体 倍 增 时 间 为 23.41 h， 指 数 生 长 期 均 为 其他 3 种培养基 (图 1-f)。

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