Page 21 - 《水产学报》2026年第3期

3 期 水 产 学 报 50 卷

200 μm 1 200 μm 2 200 μm 3 200 μm 4

200 μm 5 100 μm 6 200 μm 7 100 μm 8

200 μm 9 100 μm 10 200 μm 11 100 μm 12

图版 Ⅱ 日本鳗鲡卵巢组织细胞原代培养及传代培养
1.日本鳗鲡卵巢细胞原代培养 3 d；2.日本鳗鲡卵巢细胞原代培养 5 d；3.日本鳗鲡卵巢细胞传代培养第 1 代 (P1)；4.日本鳗鲡卵巢细胞传代
培养 P5；5.日本鳗鲡卵巢细胞传代培养 P15；6.日本鳗鲡卵巢细胞传代培养 P15 局部放大；7.日本鳗鲡卵巢细胞传代培养 P25；8.日本鳗鲡
卵巢细胞传代培养 P25 局部放大；9.日本鳗鲡卵巢细胞传代培养 P50；10.日本鳗鲡卵巢细胞传代培养 P50 局部放大；11.日本鳗鲡卵巢细胞
传代培养 P120；12.日本鳗鲡卵巢细胞传代培养 P120 局部放大。
Plate Ⅱ Primary culture and subculture of A. japonica ovarian tissue cells
1. primary culture of ovarian cell of A. japonica on 3 d; 2. primary culture of ovarian cell of A. japonica on 5 d; 3. passage first generation (P1) of A.
japonica ovarian cell; 4. P5 of A. japonica ovarian cell; 5. P15 of A. japonica ovarian cell; 6. local amplification of P15 in A. japonica ovarian cell; 7.
P25 of A. japonica ovarian cell; 8. local amplification of P25 in A. japonica ovarian cell; 9. P50 of A. japonica ovarian cell; 10. local amplification of P50
in A. japonica ovarian cell; 11. P120 of A. japonica ovarian cell; 12. local amplification of P120 in A. japonica ovarian cell.
细胞贴壁 (图版Ⅲ-1)；至第 8 天，细胞扩增显著， 好，在 48 h 内即可铺满瓶底，形态呈典型的成纤
瓶底覆盖率达 70%~80%，呈放射状排列生长 (图 维样，与冻存前相比无明显差异 (图版Ⅳ-1~2)；
版Ⅲ-2)；约 15 天后获得足够细胞量启动传代培养。 复苏后的细胞能够正常传代，生长状态良好，其
早期代次 (P1~P15)，细胞生长相对缓慢，形态以 形态特征与冻存前细胞及复苏后初期细胞保持一
长纤维状为主，形态趋于稳定，每 5 天按 1∶2 比 致 (图版Ⅳ-3~4)。细胞饥饿处理 30 d 后，培养液
例传代 (图版Ⅲ-3~4)；中期代次 (P15~P30)，细胞 颜色由橙色转变为浅黄色，表明营养物质被显著
生长状态稳定，增殖速率加快，培养密度高 (图版 消耗，同时出现大量细胞脱落形成的空洞区域，
Ⅲ-5~8)；稳定传代 (P30~P100)，细胞形态饱满， 部分细胞因营养耗竭发生皱缩导致折光性增强 (提
保持长纤维状特征 (图版Ⅲ-9~12)。该细胞系已持 示早期凋亡)，其余细胞形态保持完整，存活率较
续培养超过 300 d，稳定传代至 100 代，命名为日 高 (图版Ⅳ-5~8)；补充新鲜完全培养液Ⅱ后，存
本鳗鲡精巢组织细胞系 (A. japonica testicular tis- 活细胞重新贴壁增殖，分裂活跃且形态恢复正常，
sue cell line，AJTTCL)。 在 24 h 后长满细胞培养瓶底 (图版Ⅳ-9~12)，表明
对日本鳗鲡卵巢、精巢组织细胞进行冻存后 细胞具有良好的冻存耐受性和较高的稳定性，能
复苏，结果显示，大部分细胞复苏后贴壁生长良 够长期保种，用于后续功能实验的开展。

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