Page 26 - 《水产学报》2026年第3期

3 期 钟照威，等：日本鳗鲡性腺细胞系高效构建及其应用 50 卷

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200 μm 1 1 200 μm 2 2 200 μm 3 3
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200 μm 4 4 200 μm 5 5 200 μm 6 6
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图版 Ⅴ 日本鳗鲡性腺组织细胞系转染 EGFP 后荧光检测图
1.AJOTCL 的细胞核染色 (DAPI)；2.AJOTCL 的绿色荧光蛋白表达情况 (EGFP)；3.AJOTCL 的细胞核染色 (DAPI) 和绿色荧光蛋白表达情况
(EGFP) 的叠加 (Merge)；4.AJTTCL 的细胞核染色 (DAPI)；5.AJTTCL 的绿色荧光蛋白表达情况 (EGFP)；6.AJTTCL 的细胞核染色 (DAPI) 和
绿色荧光蛋白表达情况 (EGFP) 的叠加 (Merge)。
Plate Ⅴ Fluorescence detection diagram of gonadal tissue cell lines in A. japonica after transfection with EGFP
1. AJOTCL nuclear staining (DAPI); 2. AJOTCL green fluorescent protein expression (EGFP); 3. AJOTCL nuclear staining (DAPI) and green fluores-
cent protein expression (EGFP) superposition (Merge); 4. AJTTCL nuclear staining (DAPI); 5. AJTTCL green fluorescent protein expression (EGFP); 6.
AJTTCL nuclear staining (DAPI) and green fluorescent protein expression (EGFP) superposition (Merge).
染结果表明，两株细胞系均能高效介导外源基因 呈现增殖加速、排列紧凑及密度增加的状态 (图版
表达，适用于相关基因功能的研究。 Ⅵ-5~8)。qRT-PCR 检测多能性因子表达变化，显
示过表达 lin28a 组中 lin28a、oct4、klf4、nanog、
2.5 基因过表达后细胞系状态及相关基因的表达
lin28b 的表达极显著上调，c-myc 显著上升，sox2、
AJOTCL 细胞系过表达 nanog 24 h 后，细胞 klf4 无 显 著 变 化 (图 3-c)； 而 过 表 达 lin28b 组 中
增殖加速，数量显著增加，形态呈现饱满特征 (图 lin28a、klf4、c-myc、nanog、lin28b 的表达极显
版Ⅵ-1~2)。qRT-PCR 检测显示，nanog 表达量极 无显著变化
著上调，sox2、oct4 显著升高，klf4
显著上调 (约 252.4 倍)，其核心调控因子 oct4、 (图 3-d)。
sox2、c-myc、wnt3a 表达显著上升，klf4、lin28a
2.6 dsRNA 干扰后细胞系状态及相关基因的表达
表达亦明显升高 (图 3-a)，表明 nanog 过表达除强
烈激活自身转录外，对 oct4、sox2、klf4、wnt3a nanog 基因干扰后，AJOTCL 与 AJTTCL 细
的促进作用最为显著。 胞均呈现显著形态异常：细胞生长速率显著减缓，
过表达 oct4 的 AJOTCL 细胞增殖加快，数量 均出现空泡化、边缘折光性增强等特征，表明细
增多，形态趋于紧凑并呈紧密簇状排列 (图版 胞状态恶化；细胞活性明显降低，部分甚至脱落
Ⅵ-3~4)。qRT-PCR 检测显示，oct4 表达显著上升 死亡，继续培养 5~7 d 后基本凋亡 (图版Ⅶ-1~8)。
(约 98.35 倍)，信号通路因子 nanog、sox2、klf4、 qRT-PCR 结果显示，nanog 表达量显著下调，与
c-myc 同步显著上调，lin28a 表达量明显升高 (图 3-b)。 细胞增殖相关的基因 (如 sox2、oct4 等) 表达同步
AJTTCL 细胞过表达 lin28a 或 lin28b 后，均 降低 (图 4-a~b)。

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