Page 30 - 《水产学报》2026年第3期

3 期 钟照威，等：日本鳗鲡性腺细胞系高效构建及其应用 50 卷

关键环节，直接决定了外源或内源基因能否成功 和自我更新中起着至关重要的作用。AJOTCL 与
导入细胞内并实现有效表达。在哺乳动物细胞系 AJTTCL 对外源多能性基因的响应性及其对下游
中，脂质体转染法已被广泛应用并取得良好效 网络的调控能力，证实了其作为离体基因功能研
果 。然而，该方法在鱼类细胞系中的转染效率 究工具的独特价值，具有广阔而可靠的应用前景。
[36]
普遍较低，严重制约了鱼类细胞基因编辑技术的 综上所述，本研究通过体外培养分别建立
发展。如长江鲟鳍条细胞系 (YSCF) 的转染效率仅 了两株日本鳗鲡性腺组织细胞系：AJOTCL 和
为 10%~15% ，团头鲂 (Megalobrama amblyceph- AJTTCL。这两株细胞系均以体细胞为主，具备高
[21]
[37]
ala) 鳍条细胞系 (MAF) 的转染效率为 5% ，而中 度遗传稳定性和较高转染效率，可作为瞬时转染
华鲟 (A. sinensis) 鳍条细胞系 (CSTF) 的转染效率 与稳定转染的有效工具，应用于在细胞水平深入
更是低至 2% 。尽管新建立的斑马鱼胚胎细胞系 研究基因功能及其调控网络，也为鳗鲡生殖机制
[38]
[39]
脂质体转染效率可达 40% ，但仍难以满足高效 与 iPSCs 诱导研究提供离体模型。
基因操作的需求。针对这一技术瓶颈，电穿孔技
（作者声明本文无利益冲突）
术作为一种强有力的基因编辑方法展现出显著优
势，能够有效提升细胞的转染效率 [40-41] 。本实验
参考文献 (References)：
室 的 前 期 研 究 证 实 ， 采 用 脂 质 体 转 染 法 处 理
[ 1 ] 农业农村部渔业渔政管理局, 全国水产技术推广总站, 中国
LYCMs，转染 48 h 后仅能检测到 EGFP 的表达 ；
[8]
水产学会. 中国渔业统计年鉴 [M]. 北京: 中国农业出版社,
而用电转染技术对 LYCT、LYCO 进行转染时，
2025.
可观察到明显的绿色荧光信号，转染效率高达
Ministry of Agriculture and Rural Affairs of the People's
[9]
60% 。本研究通过电转染法处理的 AJOTCL 和
Republic of China, National Fisheries Technology Extension
AJTTCL 分别实现了 70%~80%和 50%~60% 的高
Center, China Society of Fisheries. China fishery statistical
转染效率，为外源基因的表达研究和遗传操作提 yearbook[M]. Beijing: China Agriculture Press, 2025 (in
供了高效可靠的技术平台。 Chinese).
本研究通过基因过表达和干扰 AJOTCL 和 [ 2 ] Ohta H, Kagawa H, Tanaka H, et al. Artificial induction of mat-
AJTTCL，检测分析相关基因的表达变化，验证细 uration and fertilization in the Japanese eel, Anguilla
胞 系 的 应 用 潜 力 。 细 胞 系 过 表 达 多 能 性 因 子 japonica[J]. Fish Physiology and Biochemistry, 1997, 17(1-6):
nanog、oct4 及 lin28a/b 后，细胞生长速率显著加 163-169.
快，其中 AJOTCL 过表达 nanog 及 oct4、AJTTCL [ 3 ] Masuda Y, Imaizumi H, Oda K, et al. Artificial completion of
过表达 lin28a 或 lin28b 后，以其为中心的信号通 the Japanese eel, Anguilla japonica, life cycle: challenge to
路中的多能性因子明显被激活，这一结果与既往 mass production[J]. Bulletin of Fisheries Research Agency,
研究一致。过表达 oct4 的猪成纤维细胞形态急剧 2012(35): 111-117.
变化，细胞增殖和迁移能力增强 ；在人大动脉 [ 4 ] Lai X J, Peng S, Wang Y L. Dynamic transcriptome analysis of
[42]
平滑肌细胞及人骨髓间充质干细胞中分别过表达 ovarian follicles in artificial maturing Japanese eel (Anguilla
japonica)[J]. Theriogenology, 2022, 180: 176-188.
oct4 后，均促进了 oct4 上下游多能性因子的表达
[ 5 ] Collet B, Collins C, Lester K. Engineered cell lines for fish
[43]
水平 。短暂过表达 nanog，可激活猪胚胎成纤维
health research[J]. Developmental & Comparative Immuno-
细 胞 (PFF) 中 oct4 (5 倍 )、 c-myc (2 倍 ) 和 sall4
logy, 2018, 80: 34-40.
(5 倍) 的表达 [44] ，亦能显著提高大黄鱼 LYCO 和
[ 6 ] Wolf K, Quimby M C. Established eurythermic line of fish cells
[9]
LYCT 中 oct4、 c-myc 等 基 因 的 表 达 量 ； oct4/
in vitro[J]. Science, 1962, 135(3508): 1065-1066.
sox2/nanog/lin28(OSNL) 的混合物在 LYCMs 中过
[ 7 ] Gao Y, Zhou H H, Gao Z Y, et al. Establishment and character-
[45]
表达可使体细胞重编程为多能干细胞 (iPSCs) 。 ization of a fibroblast-like cell line from the muscle of turbot
然而，当干扰 nanog 后，导致日本鳗鲡 AJOTCL (Scophthalmus maximus L. )[J]. Fish Physiology and Biochem-
和 AJTTCL 的细胞增殖能力显著减弱，甚至出现 istry, 2019, 45(3): 1129-1139.
衰亡现象，同时与细胞生长相关的多能性因子的 [ 8 ] Zhao L P, Zhong Z W, Zhuang D H, et al. Evidence of virus-
表达也相应下降，表明 nanog 在细胞的生长状态 responsive pathways in response to poly I: C challenge in a

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