Page 28 - 《水产学报》2026年第3期

3 期 钟照威，等：日本鳗鲡性腺细胞系高效构建及其应用 50 卷
300
150
*** EGFP 125 *** *** EGFP
250
相对mRNA表达水平 relative mRNA levels 200 *** *** ** *** *** 相对mRNA表达水平 relative mRNA levels 100 *** *** *** ** ns
oct4
nanog
150
50
70
30
50
30
10
10
2
2
1
0 * 3
0
oct4 sox2 klf4 cmyc nanog lin28a wnt3a oct4 sox2 klf4 cmyc nanog lin28a wnt3a
不同基因 不同基因
different genes different genes
(a) (b)
80 lin28a *** 80 EGFP *** ***
EGFP
70
70
相对mRNA表达水平 relative mRNA levels 50 ** *** ** *** 相对mRNA表达水平 relative mRNA levels 40 * ** *** ***
60
60
lin28b
50
40
30
20
30
20
5
4
5
4
3
2
2
1
1 ns ns 3 ns
0 0
oct4 sox2 klf4 cmyc nanog lin28a wnt3a oct4 sox2 klf4 cmyc nanog lin28a wnt3a
不同基因 不同基因
different genes different genes
(c) (d)

图 3 日本鳗鲡性腺组织细胞系过表达基因后相关基因的表达变化
(a) AJOTCL 过表达 nanog 后相关基因的表达变化；(b) AJOTCL 过表达 oct4 后相关基因的表达变化；(c) AJTTCL 过表达 lin28a 后相关基因
的表达变化；(d) AJTTCL 过表达 lin28b 后相关基因的表达变化。ns. P>0.05；*. P<0.05；**. 0.05<P<0.01；***. P<0.001，下同。
Fig. 3 The changes of related gene expression in the gonad tissue cell lines of A. japonica after overexpression of genes
(a) expression changes of related genes after nanog overexpression in AJOTCL; (b) expression changes of related genes after oct4 overexpression in
AJOTCL; (c) expression changes of related genes after lin28a overexpression in AJTTCL; (d) expression changes of related genes after lin28b overex-
pression in AJTTCL; ns. P>0.05; *. P<0.05; **. 0.05<P<0.01; ***. P<0.001, the same below.
系 (如添加特定生长因子或采用共培养策略) 才有 胞系 (SCO1) ，半滑舌鳎卵巢细胞系 (CSO) [34] 及
[33]
[13]
可能获得其生殖细胞系。本研究所获得的日本鳗 双斑东方鲀 (T. bimaculatus) 性腺细胞系 (TBO /
[14]
鲡性腺体细胞系也可为后续采用共培养法获得其 TBTc ) 等均显示 1∶2 为较优的传代比例。随着
生殖细胞系提供饲养层细胞。 代次增加，细胞生长速率出现减缓，可能与内源
生长因子逐渐耗竭相关。本研究通过培养基对比
3.2 基于细胞生长特性的培养条件优化
发现，AJOTCL 和 AJTTCL在 L-15 培养基中的增
通过对不同传代比例的筛选，确定 1∶2 或 殖能力显著优于 MEM 和 M199，倍增时间缩短
1∶3 为 AJOTCL 与 AJTTCL 的最适传代比例，该 40% (P<0.01)。究其原因，L-15 培养基含有较高
比例下细胞增殖速率显著高于其他比例。接种密 浓度的氨基酸和维生素，且不含碳酸氢盐缓冲系
度过低可能导致细胞周期阻滞，从而抑制增殖， 统，更适于开放式细胞培养，其营养成分和缓冲
本研究进一步印证了细胞接种密度对增殖效率的 体 系 更 有 利 于 鳗 鲡 性 腺 细 胞 贴 壁 与 增 殖 ； 而
重要调控作用。这一发现与多种鱼类细胞系的研 M199 和 MEM 作为常用培养基，其特定组分 (如
究一致，如大黄鱼肌肉 (LYCMs)、卵巢 (LYCO) 微量元素、激素或生长因子基础水平) 可能无法充
及精巢 (LYCT) 细胞系 ，红鳍东方鲀卵巢细胞系 分满足鳗鲡性腺细胞的特殊代谢需求。本研究通
[9]
(TSOC1/TSOC2) ，斑马鱼 (Danio rerio) 肌肉细胞 过添加生长因子 (如 bFGF/EGF)、日本鳗鲡血清
[18]
系 (DRM) ，南方鲇 (Silurus meridionalis) 卵巢细 (1%)、日本鳗鲡胚胎提取物 (1%) 等，可显著提升
[32]
中国水产学会主办 sponsored by China Society of Fisheries https://www.china-fishery.cn
13