Page 18 - 《水产学报》2026年第3期

3 期 钟照威，等：日本鳗鲡性腺细胞系高效构建及其应用 50 卷

表 1 不同培养液各组分含量
Tab. 1 Contents of various components in different mediums
培养液的组成成分 完全培养液Ⅰ 完全培养液Ⅱ
the components of the culture medium complete culture solution Ⅰ complete culture solution Ⅱ
莱博维茨L-15培养基 Leibovitz's L-15 medium 500 mL 500 mL
胎牛血清 fetal bovine serum 15% 15%
重组人表皮生长因子 human EGF 5 μg/L 5 μg/L
重组人碱性成纤维细胞生长因子 human FGF-basic 20 μg/L 10 μg/L
羧甲基纤维素 carboxyl methyl cellulose 50 μg/L 50 μg/L
N-乙酰氨基葡糖 N-acetylglucosamine 50 μg/L 50 μg/L
β-硫基乙醇 β-mercaptoethanol 100 μmol/L 100 μmol/L
青霉素 penicillin 100 IU/mL 100 IU/mL
链霉素 streptomycin 100 μg/mL 100 μg/mL
两性霉素B amphotericin B 100 μg/mL
鳗鲡血清 fish serum (AJ-FS) 1%
鳗鲡胚胎提取物 eel embryo extract (AJ-EE) 1%

OⅢ SS

OW
TW Sc
OⅡ

CT

S
CT LC

100 μm 1 10 μm 2

图版 Ⅰ 原代培养日本鳗鲡性腺的组织学结构
1.用于原代培养的日本鳗鲡卵巢组织 (第Ⅱ期) 结构图；2.用于原代培养的日本鳗鲡精巢组织 (中期) 结构图。CT.结缔组织；LC.精小叶腔；
OW.卵巢壁；S.成熟精子；Sc.支持细胞；SS.次级精母细胞；TW.精巢壁；OⅡ.第Ⅱ时相卵母细胞；OⅢ.第Ⅲ时相卵母细胞。
Plate Ⅰ Histological structure of A. japonica gonads for primary culture
1. the histological structures of ovary (stage II) from A. japonica for primary culture; 2. the histological structures of testis (mid-stage) from A. japonica
for primary culture. CT. connective tissue; LC. lobular catvity; OW. ovarian wall; S. mature sperm; Sc. sertoli cells; SS. secondary spermatocytes; TW.
testicular wall; OII. stage II oocytes; OIII. stage III oocytes.

移除原先培养瓶中的旧培养液，PBS 溶液清洗 至新培养瓶，补齐 5 mL 完全培养液Ⅰ于 26 ℃ 进
2 次 (去除原培养液中的血清、二价金属离子)，并 行传代培养，此后每隔 2~5 天传代 1 次。
加入 1 mL 0.25% 的胰酶消化液 (含 EDTA)，轻晃 1.3 细胞生长特性分析

覆盖细胞层，倒置显微镜下观察至大多数细胞变 细胞冻存与复苏的活力 将待冻存的性
圆并解除贴壁后，立即加入 5 mL 完全培养液Ⅰ终 腺细胞 (汇合度 80%-90%) 经胰酶消化后，离心
止消化并吹打成细胞悬液，以 1∶2 的体积比接种 (1 500 r/min，5 min) 收集细胞沉淀，缓慢加入

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