Page 56 - 《水产学报》2026年第2期

2 期 水 产 学 报 50 卷

表 1 引物序列
Tab. 1 Primer sequences
引物名称 引物序列 (5'→3') 退火温度/℃ 产物长度/bp 用途
primer name primer sequences (5'→3') T m product length purpose
NqF1 GAACCCTGAAGGAAAATGGCTGCGA 71.4 885 3′-RACE
NqF2 CTTCCTGCTATTCTCAAAGGCTGGC 67.0 643
NqF3 CCTTCTTCTCCAAGCGGGGTCTGTT 70.0 479
NqR1 TGAACAAAATCTAAAGGTTTCTCGGCA 66.8 691 5′-RACE
NqR2 CCGTCCCGCCAGTAGTGAACGATAA 70.2 477
NqR3 GAGAATAGCAGGAAGACTCATCCAGTACAT 65.5 353
UPM Long CTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT 3′-RACE, 5′-RACE
UPM Short CTAATACGACTCACTATAGGGC
NQO1-F TACTGGATGAGTCTTCCTGCTATTC 60.3 147 RT-qPCR
NQO1-R CCCGCCAGTAGTGAACGATAA
EF1a-F GGAACTTCCCAGGCAGACTGTGC 60.1 191
EF1a-R TCAAAACGGGCCGCAGAGAAT
Nq-pro-R1 TTAAAGGACCGGGGTTCCTGGTG 68.1 启动子扩增
Nq-pro-R2 ACTATTAACACTCGTTTGGCCGCCA 68.1
Nq-pro-R3 TGGCCGCCATGGTGGCTTGTA 70.8
LAD1-1 ACGATGGACTCCAGA (G/C/A) N (G/C/A) NNNGGAA
LAD1-2 ACGATGGACTCCAGA (G/C/T) N (G/C/T) NNNGGTT
LAD1-3 ACGATGGACTCCAGA (G/C/A) (G/C/A) N (G/C/A) NNNCCAA
LAD1-4 ACGATGGACTCCAGA (G/C/T) (G/A/T) N (G/C/T) NNNCGGT
AC1 ACGATGGACTCCAGAG
NP1-fluF GGGGTACCTAACTATGAAAGGTGCAAATGCCTGA 60.1 227 双荧光素酶
质粒构建，
NP2-fluF GGGGTACCTATAAAATAGGGGTTGGGGTGCATAAA 60.4 514
启动子突变
NP3-fluF GGGGTACCGCAAGCCGAGTATTTCAAAAACGG 61.0 680
NP4-fluF GGGGTACCCAAATTTCTTAACTTAAGGCTATGGTGTGA 61.3 910
NP5-fluF GGGGTACCTTTCTACATGCAATTTTCATGTCCGAAG 60.7 1 135
NfluR CCGCTCGAGACTATTAACACTCGTTTGGCCGC 60.6
MUT1F ACTTCCCAACACACCAAATGGCATTTGGATGTGAAAAATGCAG 60.7 558 启动子突变
MUT1R GGTGTGTTGGGAAGTTACTCACAATGCAAACGCAAGCC 60.6 138
MUT2F ACCAAAACATGCGGACCTCTTCTGCTATGAACTGCCA 60.6 502
MUT2R CCGCATGTTTTGGTCCCTATTTTATACCTGCATTTTTCACATC 61.0 193
FMNF CGGGATCCATGGCGGCCAAACGAGTGTTAATA 61.0 795 原核表达质粒构建
FMNR CGGAATTCTTATTTGAAAGGTTTTCCGAAATTCTGGC
注：下划线表示Kpn I、Xho I、BamH I 和 EcoR I酶切位点及其保护碱基，粗体表示HcNQO1启动子中的突变序列。
Notes: Underlining indicates Kpn I, Xho I, BamH I and EcoR I cleavage sites and their protective base pairs, and bold indicates mutated sequences in the
HcNQO1 promoter.

清的 DMEM 培养基 (5% CO ，37 ℃)，待细胞融合 酶标仪 (Biotek Synergy™ H1，美国) 按照试剂盒
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™
度约达 80%，采用 Lipofectamine 3000 转染试剂， 说明书测定双荧光素酶活性。
共转染 100 ng pcDNA3.1-Neh1 或对照 pcDNA3.1 结果显示，pGL3-NQO1-P3 片段驱动的荧光
(+) 质粒、75 ng 荧光素酶报告质粒和 25 ng pRL-TK 素酶活性最高。通过 JASPAR 数据库 (https://jas-
内参质粒。转染 24 h 后，裂解细胞，使用多功能 par.elixir.no/search?advanced=true) 预测，该片段存

https://www.china-fishery.cn 中国水产学会主办 sponsored by China Society of Fisheries
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