Page 61 - 《水产学报》2026年第2期

2 期 杨清麟，等：三角帆蚌 NQO1 基因的克隆、表达及其与 Nrf2 信号通路的调控关系 50 卷

(a)
M 1 M 1 2 3 4 5 6
bp
bp
2 000
2 000
1 000
750 1 000
750
500 500
250 250
100 100

(b) (c)
+pcDNA3.1
−1 109 +26
luc pGL3-NQO1-P5 c
−884 +26
luc pGL3-NQO1-P4 c
−654 +26
luc pGL3-NQO1-P3 b
−488 +26
luc pGL3-NQO1-P2 a
−201 +26
luc pGL3-NQO1-P1 e
pGL3-Basic d
0 1 2 3 4
相对比值 (荧光/内参)
relative LUC/REN

(d)
图 6 HcNQO1 启动子序列的扩增及其基本特征
(a) HcNQO1 启动子序列及其通过 JASPAR 软件预测的元件。紫色部分为预测的 ARE 元件，绿框部分为预测的 Nrf2 (MafK 位点)，红框部
分为编码序列起点；(b) 启动子序列扩增的 hiTAIL-PCR 结果凝胶电泳图，M. 2 000 bp DNA marker，1. 第三轮 PCR 产物；(c) 菌液 PCR 验
证 HcNQO1 启动子片段插入荧光素酶报告质粒 pGL3-Basic 的结果，M. 2 000 bp DNA marker，1. pGL3-Basic 空载质粒，2～6. 带有
HcNQO1 启动子片段 P1~P5 的 pGL3-Basic 质粒；(d) HcNQO1 启动子不同片段在 293FT 细胞中的本底转录活性检测，将 pRL-TK 内参质粒、
pGL3-HcNQO1 报告质粒与 pcDNA3.1 (+) 或 pcDNA3.1-Neh1 共转染至 293FT 细胞，检测不同片段的转录活性。
Fig. 6 Amplification of the HcNQO1 promoter sequence and its basic characteristics
(a) the promoter sequence of the HcNQO1 and elements predicted by JASPAR are color-coded. The purple sections are the predicted ARE elements, the
green boxed sections are the predicted Nrf2 (MafK sites), and the red boxed section is the starting point of the coding sequence; (b) the gel electrophore-
togram of hiTAIL-PCR for promoter. M. 2 000 bp DNA marker, 1. the third round PCR product; (c) bacteriophage PCR validation of the HcNQO1 fire-
fly luciferase plasmid. M. 2 000 bp DNA marker, 1. pGL3-Basic, 2-6. pGL3-Basic with the HcNQO1 promoter fragments P1-P5; (d) native transcrip-
tional activity of different fragments of the HcNQO1 promoter in 293FT cells. Co-transfection of pRL-TK, pGL3- HcNQO1 with pcDNA3.1 (+) or
pcDNA3.1-Neh1 into 293FT cells.
帆蚌 8 种组织 (血淋巴、鳃、肝胰腺、外套膜、斧 且上述 4 组间未呈现统计学显著性差异 (P>0.05)。
足、闭壳肌、肠道、性腺) 中 pET30a-NQO1 蛋白 相较之下，血淋巴组织中的表达量最低，约为最
的表达水平。通过 Image J 软件对 Western blot 条 高表达组织的 34% (图 8-c，d)。该表达模式提示
带灰度值进行定量分析，结果显示，肝胰腺、外 pET30a-NQO1 蛋白可能在该贝类的氧化应激防御
套膜、斧足和闭壳肌组织的蛋白表达水平最高， 系统中具有组织特异性功能。

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