Page 52 - 《水产学报》2026年第2期

2 期 水 产 学 报 50 卷

跨组织/性别系统评估曼氏无针乌贼内参基因的稳定性

李 双， 谷 敏， 叶孝文， 叶 彬， 刘思语，
余 佳， 周 旭， 迟长凤 *

(浙江海洋大学海洋科学与技术学院，海洋生物种质资源发掘利用
国家地方联合工程研究中心，浙江 舟山 316022)

摘要： 【目的】系统评估曼氏无针乌贼雌雄个体多种组织中 5 个常用内参基因 (18S、ef-1α、
ef-1γ、gapdh 和 β-actin) 的表达稳定性，筛选适用于实时荧光定量 PCR (qPCR) 分析的最佳
内参基因及其数量。 【方法】采集 10 尾健康曼氏无针乌贼 (雌雄各 5 尾) 的 15～16 种组织，
提取总 RNA 并反转录为 cDNA。通过 qPCR 检测基因表达，结合 geNorm、NormFinder、
BestKeeper 和 ΔC 等 t 4 种算法及 RefFinder 综合评价基因稳定性，利用 geNorm 配对变异分
析（V n/n+1 < 0.15）确定最佳内参基因数量。选取 4 个转录组来源的靶基因 (creld2、cd109、
t
acy1、miox) 进行验证。 【结果】5 个基因 C 值为 15.47～20.83，β-actin 和 gapdh 在组织及
性别间波动最大，不宜作为通用内参；18S 表达量最高 (C 均值为 15.47~16.29)，变异最小，
t
但存在性别偏倚表达；ef-1α 与 ef-1γ 在多数组织和 2 个性别中表现出较高的稳定性，其中
ef-1α 表达最稳定，无任何性别偏倚。虽然各基因在不同组织和性别间的稳定性模式及具
体排名存在差异，但多算法综合结果表明，ef-1α 和 ef-1γ 整体稳定性最高，其次为 18S，
而 β-actin 和 gapdh 稳定性最低，在雌雄中的最终排名为 ef-1γ > ef-1α > 18S > gapdh > β-
actin (雄)；ef-1α > ef-1γ > 18S > gapdh > β-actin (雌)。geNorm 分析显示，多数组织使用 2 个
内参基因 (主要为 ef-1α 和 ef-1γ) 即可满足归一化要求 (V < 0.15)。验证实验表明，使用稳
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定内参组合 (ef-1α 和 ef-1γ) 能准确反映组织间表达差异，而使用不稳定内参基因组合 (β-
actin 和 gapdh) 则导致多数靶基因失去统计显著性。 【结论】ef-1α 和 ef-1γ 是曼氏无针乌贼
qPCR 分析中最适宜的内参基因组合，18S 可作为辅助基因用于性别内比较，避免单独使
用 β-actin 或 gapdh。本研究首次建立了曼氏无针乌贼内参基因选择的系统化框架，为后续
曼氏无针乌贼及其他头足类基因表达研究提供了可靠参考。
关键词: 曼氏无针乌贼；内参基因；实时荧光定量 PCR；表达稳定性；RefFinder

中图分类号: Q 78; S 91 文献标志码: A

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