Page 186 - 《水产学报》2026年第01期

1 期 水 产 学 报 50 卷

(每次 20 min)；浸蜡于液态石蜡 (熔点 56~58 ℃， 连宝生物, 中国)，通过 Nanodrop 2000 微型紫外分
Leica，德国) 中分 3 次浸渍 (每次 1 h，60 ℃ 恒温)。 光光度计 (Thermo 公司，美国) 测定 260/280 比值，
TM
随后使用石蜡切片机 (RM2235，Leica，德国) 制 利用 Prime Script RT 试剂盒 (大连宝生物, 中国)
备 4 μm 厚连续切片，贴附于多聚赖氨酸载玻片 获得 cDNA 第一链。使用 SYBR Premix Ex Taq(大
®
(Servicebio，中国)。切片经 2 次二甲苯脱蜡 (每次 连宝生物, 中国) 试剂盒在 LightCycler 480 II(Roche
10 min)、梯度乙醇复水后，进行苏木精染色 5 min， 公司，瑞士) 荧光定量 PCR 仪上进行分析，循环
流水冲洗返蓝，1% 盐酸乙醇分化 3 s，再以 0.5% 条件设置：95 ℃ 10 s 预变性，95 ℃ 5 s，57 ℃
伊红水溶液染色 1 min。最后经梯度乙醇脱水、二 30 s 进行 40 个循环，72 ℃ 30 s 终止反应，借助
甲苯透明，中性树胶封片，于 Eclipse 200 光学显 2 −∆∆C t 法 测 定 基 因 的 相 对 表 达 水 平 ， β-actin 和
[22]
[23]
微镜 (尼康公司，日本) 下观察并拍照。 GAPDH 作为管家基因 。根据 MIQE 指南 ，每
个样本进行 3 次检测，每次检测独立重复 3 次。
1.7 总 RNA 提取、cDNA 合成及 qPCR 分析
本 实 验 所 用 于 实 时 荧 光 定 量 聚 合 酶 链 式 反 应
采用 RNAiso 试剂盒从肝脏中提取总 RNA(大 (qPCR) 的引物序列见表 2。

表 2 大口黑鲈 qPCR 分析引物设计
Tab. 2 Primers used for qPCR analysis from M. salmoides
目的基因 上游引物(5′-3′) 下游引物(3′-5′) 大小/bp
target gene forward primer (5′-3′) reverse primer (3′-5′) size
sod CATTTCAATCCCCACAACAAGA CTTTGCGACATTATCTGCTCCT 102
gr TTATGTCGGTCACCTAAATCG CCTGGAACTTCAGCATCACTC 195
gpx CCCTGCAATCAGTTTGGACA TTGGTTCAAAGCCATTCCCT 94
cat CTGCTGTTCCCGTCCTTCAT GGTAGCCATCAGGCAAACCT 154
il-1 ACCTCTAACCCAGGGCTGAT GGTTCCATTCAGTGGCGAGA 102
il-8 CAGTGGTGTCGCTGCATACG AGAGCCGTTTCTCCTGGTGA 129
P53 ACGGATCTCTGTCCCTCCAA GTCCTGTTGCTCAGAGACCC 246
bax GCTTGTCACCACAGCCATTG TACAGCAGACCAGCACAAGG 134
bcl-2 TGGGAAATTCAACTGGGGCA GGTGAGAACACCAGCCAAGA 241
caspase 3 CACGGTGATGAGGGTGTGTT CCAGATCAGTGCCTCTGCAA 145
caspase 9 GCTTCCCTGGTGCTGTGTAT AGGCGACACCTCAAATCCTG 167
β-actin CTCTGCATACATGCCTACAC GTAGAGTTTCTCCCCATCAGG 117
gadph AGGTCATCACCATCGGCAAT TGTAGGTAGTCTCGTGGATTCC 102

1.8 统计分析 式中，N 为终末尾数，N 为初始尾数，W 为终末
t
0
t
体重 (g)，W 为初始体重 (g)，W 为摄入饲料量
实验数据使用 SPSS 26.0 软件进行单因素方差 0 f
分析。采用 Duncan 氏检验进行多重比较，显著差 (g)，W 为鱼肝脏重 (g)，W 为鱼体重 (g)，L 为鱼
h
0
异为 P<0.05。统计数据均以平均值±标准差 (mean 体长 (cm)，t 为养殖天数 (d)，S 为饲料粗蛋白含
± SD) 表示。 量 (%)。
生长性能相关计算公式：
2 结果
存活率 (SR, %) = N / N × 100%
0
t
增重率 (WGR, %) = (W −W ) / W × 100% 2.1 饲料中添加白藜芦醇对大口黑鲈生长性能、
0
t
0
特定生长率 (SGR %/d) = (ln W −ln W ) / t × 100%
0
t
饲料系数 ( FCR) = W / (W −W ) 血液健康、抗氧化酶活性、炎症及细胞凋亡的
t
0
f
肝体指数 (HSI, %) = W / W ×100% 影响
h
3
肥满度 (CF, g/cm ) = W / L ×100 各 实 验 组 间 存 活 率 (100%) 无 显 著 性 差 异
3
蛋白效率 (PER, %) = (W −W ) / (W ×S )×100% (表 3)；饲料中添加白藜芦醇显著提高了实验鱼
f
0
0
t
https://www.china-fishery.cn 中国水产学会主办 sponsored by China Society of Fisheries
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