Page 45 - 《水产学报》2025年第12期

陈帅钰，等 水产学报, 2025, 49(12): 129604

氧量的变化，当水中溶解氧含量下降到 P cri t 和 经包埋机 (KH-BL，湖北孝感阔海医疗科技有限
LOE 点时将实验鱼迅速捞出取样，同时开启水 公司) 包埋，再放至冷冻机上冷冻，用切片机
循环系统，使水中溶解氧含量在 30 min 内恢复 (KH-Q330，湖北孝感阔海医疗科技有限公司)
至对照组水平，待溶解氧恢复正常状态 24 h 后 连续切成 5 μm 厚的薄片后放进展片机中展片。
再次取样。 采用苏木精-伊红 (H.E) (G1120，北京索莱宝科
使用 200 mg/L MS-222 麻醉剂将鱼麻醉， 技有限公司) 进行染色并晾干，使用中性树脂胶
使用 1 mL 无菌注射器采血，用无菌剪刀和镊子 封片。每尾鱼选取部分肝脏组织进行石蜡包埋，
取出肝脏组织，平均分为 2 份，1 份于液氮中 每个组织块切片 3 张，通过显微镜 [DM500，
冻存，用于肝脏糖代谢 (LDH、PK、PFK、HK 徕卡显微系统 (上海) 有限公司 ] 观察分析组织
活性)、脂代谢 (LPL、FAS 活性)、抗氧化能力 切片，每个视野至少观察 200 个肝细胞，统计
(SOD、CAT、GSH-Px 活性及 MDA 含量)、糖 3 个视野的细胞形态比例。
原和乳酸含量及谷丙转氨酶 (ALT)、谷草转氨 主成分分析 通过主成分分析 (PCA) 法
酶 (AST) 活性检测；1 份于 4% 多聚甲醛 (G1101， 探究低氧胁迫和恢复溶解氧过程中斑石鲷肝脏
武汉赛维尔生物科技有限公司) 中保存，用于组 代谢参数 (糖原、乳酸含量及糖脂代谢酶活性)
织切片观察。 的整体变化趋势。所有数据经 Z-score 标准化消
肝脏糖、脂代谢指标检测 使用 0.9%
除量纲差异后，利用 Origin 2021 软件进行降维
生理盐水将肝脏组织在冰水浴中制备 10% 组织
分析，提取特征值 >1 的主成分 (累计方差贡献率 >
匀浆液，3 000 r/min 离心 10 min，取上清液。
70%)。通过得分图的可视化分析解析不同处理
按照南京建成生物工程研究所的试剂盒说明书
组的代谢特征差异。
并使用酶标仪 (SuPerMax 3100 型，上海闪谱生
物科技有限公司) 505 nm 波长检测斑石鲷肝脏 1.3 数据分析
中 ALT (微板法，C009-2-1) 和 AST (微板法， 所有实验数据均以平均值±标准差 (mean±
C010-2-1) 活性，440 nm波长检测 LDH (微板法， SD) 表示, 利用 SPSS 27 软件单因素方差分析

A020-2-2) 活性；通过用紫外分光光度计 (UV- (One-Way ANOVA) 和 Duncan 氏多重比较，采
5100，上海元析仪器有限公司) 620 nm 波长检 用 PCA 分析了缺氧过程中生理生化参数的整体
测糖原 (比色法，A043-1) 含量变化，550 nm 波 影响。P<0.05 表示结果存在显著性差异。
长检测脂蛋白酯酶 (比色法，A067-1)、脂肪酸
合成酶 (H231-1) 活性，530 nm 波长检测乳酸 2 结果
(比色法，A019-2) 含量变化，340 nm 波长检测
PK (比色法，A076-1)、PFK (比色法，A129-1- 2.1 低氧胁迫对斑石鲷肝脏抗氧化能力的影响
1)、HK (紫外法，A077-3-1) 活性。
在低氧胁迫和恢复溶解氧过程中 2 种规格
肝脏抗氧化指标检测 制备方法同“肝脏 斑石鲷肝脏 SOD、CAT、GSH-Px 活性和 MDA
糖、脂代谢指标检测”，按照南京建成生物工程
含量变化情况呈先升高后降低的趋势 (图 1)。2
研究所的试剂盒说明书使用酶标仪 450 nm 波长 种规格斑石鲷肝脏 SOD、CAT、GSH-Px 活性
检测斑石鲷肝脏 SOD (WST-1 法，A001-3-1) 活
和 MDA 含量在 P cri t 和 LOE 点均显著高于对照
性，405 nm 波长检测 GSH-Px (微板法，H545-1- 组 (P<0.05)，且均在 LOE 点达最大值，其中 200 g
2) 活性；使用紫外分光光度计 532 nm波长检测
斑石鲷的 GSH-Px 活性和 MDA 含量在 LOE 点
肝脏 MDA (TBA 法，A003-1-2) 含量，405 nm
较对照组均增加约 2.2 倍，显著高于 50 g 斑石
波长检测 CAT (钼酸铵法，A007-1-1) 活性。
鲷 (P<0.05)。恢复正常溶解氧 24 h 后，2 种规
H.E 染色 肝脏组织经 4% 多聚甲醛浸
格斑石鲷肝脏抗氧化能力恢复至正常水平，与
泡固定后，将组织修剪为 0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm
对照组无显著性差异。
方块置于干净的包埋盒中，倒入梯度浓度乙醇
2.2 低氧胁迫对斑石鲷能量代谢的影响
中进行脱水，之后放入二甲苯溶液中透明，再
放入石蜡溶液中浸蜡。将浸蜡完毕的肝脏组织 低氧胁迫过程中 2 种规格斑石鲷肝脏糖原

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