Page 7 - 《水产学报》2025年第10期

孟迎冬，等 水产学报, 2025, 49(10): 109601

表 2 qRT-PCR 引物信息 饲料系数 (FCR) = W /( W − W )；
t
0
f
Tab. 2 Primers information for qRT-PCR 摄 食 率 (FI, %/d) = m total /[(W + W )/2]/t ×
0
t
基因 引物序列 片段长度/bp 100%；
gene primer sequence fragment length
蛋白质效率 (PER) = (W − W )/m ；
pro
t
0
pept1 GACTTCTGCAGCTGACTTCG 182
TCGGCCCAAAGTCAAAAGTG 存活率 (SR, %) = N /N × 100%。
0
t
lat1 TGGCCTACTTCACCACCATT 239 式中，W 为终末体重 (g), W 为初始体重 (g)，t
t
0
CGGAGTGAAGAGGTCTGTGT
为养殖天数 (d), W 为摄食量 (g), m l 为总摄食
f
asct2 GACGTGCGGTCCACAAAATG 106 tota
TCATCCTGGCTGTTGACTGG 量 (g)，m o 蛋白质摄入量 (g)，N 为终末鱼数
t
β-actin AACTGGGATGACATGGAGAAG 113 pr
0
TTGGCTTTGGGGTTCAGG (尾)，N 初始鱼数 (尾)。
注：pept1. 寡肽转运蛋白基因；lat1. L型氨基酸转运载体基因； 采取 SPSS 26.0 软件对实验数据进行单因
asct2. 中性氨基酸转运载体基因。 素方差分析 (One-Way ANOVA)。通过 Levene
Notes: pept1. peptide transporter 1 gene; lat1. L-type amino acid
检验确认了数据的方差齐性，验证后用 Duncan's
transporter 1 gene; asct2. sodium-dependent neutral amino acid
法对实验数据进行多重比较，P＜0.05 时，认为
transporter 2 gene.
组间差异具有统计学意义。实验结果用“平均
采用 Hitachi L-8900 型全自动氨基酸分析仪 (日 值±标准误 (mean±SE)”表示。
本) 进行定量检测。肌肉样品处理方法：准确称
取 100 mg 肌肉样本，加入 400 μL 10% 磺基水 2 结果
杨酸进行低温匀浆，离心取上清液并过滤，滤
液用于肌肉组织游离氨基酸含量检测。 2.1 生长性能和饲料利用

1.9 蛋白质提取及蛋白免疫印迹 (Western blot) 生长性能和饲料利用结果显示，与 CON
分析 组相比，P48 组的终末体重、增重率和特定生
长率分别显著降低 6.95%、8.79%、4.66% (P＜
称取 25 mg 肝脏样品 (保持冰冻状态)，加
0.05)，饲料系数显著升高 5.49%(P＜0.05)。相
入含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂 (Roche，德国)
较于 P48 组，P48S 组终末体重、增重率、特定
的 RIPA 裂解液匀浆离心后取上清液。使用
生长率和蛋白质效率显著提高 19.47%、25.12%、
BCA 蛋白浓度测定试剂盒 (上海碧云天生物技
12.03%、8.76% (P＜0.05)，饲料系数显著降低
术股份有限公司) 测定蛋白质含量，加入 5×蛋
白加样缓冲液，95 °C 金属浴 5 min，离心。利 8.33% (P＜0.05)。各组摄食率、存活率无显著
用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) 技术 性差异 (P＞0.05)(表 3)。

分离蛋白质样品，将分离后的蛋白质转移至 表 3 激活 mTOR 信号通路对中国花鲈生长和
0.45 μm 的 PVDF 膜上 (Millipore，美国)。转移 饲料利用的影响
完成后，将包含蛋白质的膜封闭 1 h，以减少非 Tab. 3 Effects of activating mTOR signaling pathway
特异性结合，随后在 4 °C 下与一抗孵育 8 h。 on growth and feed utilization of L. maculatus
一抗孵育结束后继续孵育二抗 1 h。利用显影液 组别 group
项目 item
对结合抗体的膜进行处理，在显影机 [ 上工申 CON P48 P48S
贝 (集团) 股份有限公司 ] 中显影得到相应条带。 终末体重/g FBW 101.38 ± 0.45 b 94.33 ± 0.57 112.70 ± 0.32 c
a
抗体信息：S6 (Cat.no.2217)，Phospho-S6 (Ser235/ 增重率/% WGR 378.20 ± 2.13 344.97 ± 2.68 431.61 ± 1.51 c
b
a
236) (Cat.no.4856) 购买于 Cell Signaling Techno- 特定生长率/(%/d) SGR 2.79 ± 0.01 b 2.66 ± 0.01 a 2.98 ± 0.01 c
log 公司 (美国)；β-actin 购买于上海优宁维生物 摄食率/(%/d) FI 2.13 ± 0.01 2.16 ± 0.01 2.15 ± 0.01
科技股份有限公司。 饲料系数 FCR 0.91 ± 0.01 b 0.96 ± 0.01 c 0.88 ± 0.01 a

1.10 计算方法与统计分析 蛋白质效率 PER 2.17 ± 0.02 a 2.17 ± 0.01 a 2.36 ± 0.01 b
存活率/% SR 100 ± 0.00 100 ± 0.00 100 ± 0.00
增重率 (WGR, %)=(W −W )/ W ×100%； 注：不同小写字母表示组间差异显著(P<0.05);下同。
t
0
0
特定生长率 (SGR, %/d) = (lnW − ln W )/t × Notes: Values with different superscript mean significant differences
t
0
100%； between groups (P<0.05); the same below.
https://www.china-fishery.cn 中国水产学会主办 sponsored by China Society of Fisheries
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