Page 6 - 《水产学报》2025年第10期

孟迎冬，等 水产学报, 2025, 49(10): 109601

表 1 实验饲料配方及组成 (干物质) 杜马斯定氮仪 (型号 D200，济南海能仪器股份
Tab. 1 Formulation and proximate composition of 有限公司) 检测。通过索氏抽提仪 (型号 SOX606，
the experimental diets (dry matter) %
济南海能仪器股份有限公司) 检测粗脂肪含量。
组别 group 灰分测定方法：样品在电磁炉上充分燃烧碳化
原料 ingredient
CON P48 P48S 至无烟状态后转移入马弗炉 (型号 SX470，北京
鱼粉 fish meal 10.00 10.00 10.00 市永光明医疗仪器有限公司) 中于 550 °C 的高
鸡肉粉 chicken meal 30.00 28.00 28.00 温下灼烧至恒重后称量测定粗灰分含量。

大豆浓缩蛋白 7.00 6.00 6.00
concentrated soy protein 1.5 肠道组织学观察
mTOR信号通路激活剂 0.00 0.00 0.10
mTOR signalling pathway activator 切取肠道组织样品进行脱水、石蜡包埋，
膨润土 bentonite 0.00 3.00 2.90 采用手动切片机 (徕卡，德国) 将包埋组织连续
肉骨粉 meat and bone meal 5.00 5.00 5.00 切片，厚度设定为 7 μm，选取结构完整的切片
发酵豆粕 6.00 6.00 6.00 进行摊片及烘片处理，使用苏木精-伊红 (H.E)
fermented soybean meal
染色，在显微镜下观察组织形态并拍照。通过
豆粕 soybean meal 7.50 7.50 7.50
Imagine Pro Plus 6.0 软件进行分析。

棉籽蛋白 cottonseed protein 7.00 7.00 7.00
木薯淀粉 tapioca starch 5.00 5.00 5.00 1.6 血浆生化指标和肠道消化酶检测
面粉 wheat flour 10.00 10.00 10.00
使用南京建成生物工程研究所有限公司的
豆油 soybean oil 5.50 5.50 5.50
试剂盒对血浆总胆固醇 (T-CHO，A111-1-1)、甘
磷脂油 soybean lecithin 1.00 1.00 1.00
油三酯 (TG，A10-1-1)、葡萄糖 (GLU，F006-1-
维生素预混料 vitamin premix 1 1.00 1.00 1.00
1) 的含量以及肠道组织 α-淀粉酶 (AMS，C016-
矿物质预混料 mineral premix 2 0.50 0.50 0.50
1-2)、脂肪酶 (LPS，A054-2-1)、胰蛋白酶 (TRY，
其他 others 3 4.50 4.50 4.50
A080-2-2) 的活性进行检测，所有实验步骤均严
总计 total 100.00 100.00 100.00
格遵循配套说明书中的操作规范执行。
营养成分 nutrient composition
1.7 RNA 的提取和实时荧光定量 PCR (qRT-
粗蛋白 crude protein 50.72 48.16 48.20
PCR)
粗脂肪 crude lipid 12.38 12.60 12.49
干物质 dry matter 96.26 96.16 95.09 本实验采用上海碧云天生物技术股份有限
注：1. 维生素预混料(g/kg饲料)含有硫胺素 0.025，核黄素 0.045， 公司生产的 RNAeasy TM 动物 RNA 抽提试剂盒
维生素B 6 0.020，维生素B 12 0.010，甲萘醌 0.010，肌醇 0.800，泛酸
(离心柱式) 进行肠道组织 RNA 的提取，具体操
盐 0.060，烟酸 0.200，叶酸 0.020，生物素 0.060，乙酸视黄酯
0.032，维生素D 3 0.005，α-生育酚 0.240，维生素C 2.000，乙氧基喹 作严格遵循试剂盒说明书，使用的实验器材均
啉 0.003，微晶纤维素 16.470。2. 矿物质预混料(g/kg饲料)含有 无菌无酶。对提取完成的 RNA 浓度进行检测，
CoC l2 ·6H 2 O 0.050，CuSO 4 ·5H 2 O 0.010，FeSO 4 ·H 2 O 0.080，
用 DEPC 水稀释至同一浓度。将处理完毕的
ZnSO 4 ·H 2 O 0.050，MnSO 4 ·H 2 O 0.045，MgSO 4 ·7H 2 O 1.200，亚硒酸
RNA 进行反转录，制备 cDNA。使用定量 PCR
钠 0.020，钙化碘 0.060，沸石 8.485。3. 其他为鱼溶浆 2.00，蛋氨
酸 0.10，赖氨酸 0.30，苏氨酸 0.10，磷酸二氢钙 1.50，氯化胆碱 仪进行扩增，相关引物序列见表 2。实验以 β-
0.30，丙酸钙 0.10，乙氧基奎琳 0.10。 actin 作为内参基因，采用 2 −∆∆C t 法计算各目的
Notes: 1.vitamin premix (g/kg diet) contain thiamin 0.025, riboflavin
基因的相对表达量。
0.045, VB 6 0.020, VB 12 0.010, meandione 0.010, myo-inositol 0.800,
pantothenate 0.060, nicotinic acid 0.200, folate 0.020, biotin 0.060, 1.8 游离氨基酸检测
retinyl acetate 0.032, VD 3 0.005, α-tocopherol 0.240, VC 2.000,
本实验测定血浆与肌肉组织中游离氨基酸
ethoxyquinoline 0.003, microcrystalline cellulose 16.470. 2. mineral
premix (g/kg diet) contain CoC l2 ·6H 2 O 0.050, CuSO 4 ·5H 2 O 0.010, 含量。血浆样品处理方法：将冷冻保存于−80
FeSO 4 ·H 2 O 0.080, ZnSO 4 ·H 2 O 0.050, MnSO 4 ·H 2 O 0.045,
°C 的血浆样品转移至冰浴环境进行复温，待完
MgSO 4 ·7H 2 O 1.200, sodium selenite 0.020, calcium iodine 0.060,
全融化吸取 400 μL 样品加入 1.2 mL 10% 磺基
zeolite 8.485. 3. others contain fish paste 2.00, methionine 0.10, lysine
0.30, threonine 0.10, calcium dihydrogen phosphate 1.50, choline 水杨酸溶液混合，反应 5 min 后，离心取上清
chloride 0.30, calcium propionate 0.10, ethoxyquinoline 0.10. 液过 0.22 µm 滤膜进行固相萃取 (SPE) 净化处理，

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