Page 204 - 《水产学报》2025年第10期

郝甜甜，等 水产学报, 2025, 49(10): 109615

采用高效气象色谱分析仪 (GC-2010，岛津，日 书提取大菱鲆肝脏组织总 RNA，超微量分光光
本) 测定，通过脂肪酸标准品 (Sigma-Aldrich， 度计 (Thermo, Nano-Drop2000) 和 1% 琼脂糖凝
美国) 鉴定脂肪酸，采用面积归一法计算每种脂 胶电泳检测 RNA 的浓度和质量。利用 SYBR
肪酸所占的百分比。 Premix Script TM 反转录试剂盒 (AG，上海) 说明

血清、肠道酶活性测定 血清生化指标 书将提取的总 RNA 先反转录为 cDNA，−20 °C
总胆固醇 (total cholesterol，T-CHO)、甘油三脂 冰箱中备用待测。
(triglyceride， TG)、 溶 菌 酶 (lysozyme， LZM)、 依据 GenBank 序列设计荧光定量 PCR 的
碱性磷酸酶 (alkaline phosphatase，ALP)、总抗 引物 (表 2)，荧光定量 PCR 引物由生工生物工
氧 化 能 力 (total antioxidant capacity， T-AOC)、 程 (上海) 股份有限公司合成，选用 β-actin 为内
总超氧化物歧化酶 (total superoxidedismutase，T- 参 基 因 。 所 有 特 异 性 引 物 扩 增 效 率 均 为
SOD) 采用试剂盒检测 (南京建成生物工程研究 95%~105%。荧光定量 PCR 采用 SYBR® Premix
所)；肠道炎症因子指标测定均采用 ELISA 试剂 Ex Taq TM Ⅱ(AG，上海) 试剂盒进行，反应体
盒测定 (南京建成生物工程研究所)，肠道酶液 系为 20 μL，每个反应 3 个重复。反应程序：95
蛋白质浓度采用考马斯亮蓝法测定。 个循环：95 °C，15 s；
°C，3 min(预变性)；40
ppars 相关基因荧光定量表达测定 利 60 °C，15 s；72 °C，1 min。72 °C，5 min(彻底
[20]
用 RNA 快速提取试剂盒 (思科捷，山东) 说明 延伸)。采用 2 −∆∆C t 方法计算基因表达 。

表 2 实时定量 PCR 引物序列
Tab. 2 Primers used in real-time quantitative PCR
基因 引物序列 产物长度/bp GenBank登录号
genes primer sequence (5’-3’) product length GenBank reference
F:TGAACCCCAAAGCCAACAGG
β-actin 101 NC_061531.1
R:AGAGGCATACAGGGACAGCAC
F: CTACTCAAGCCTGGACCTCAACGA
pparα1 103 JN253593.1
R:TCACTGAAGGGACGCCGCA
F: CCCTGATAACAACCTTCCTCTTTCCC
pparα2 109 JQ901838.1
R: TGTCTCGGTCGTCTTGATGTCCTG
F: ACGGCAAAGGCTTCGTTACC
pparβ 147 XM_035643796.1
R: CTAATGGCAGCAACAAACAGG
F: AAGTGACGGAGTTCGCCAAGA
pparγ 121 XM_035631101.1
R: GTTCATCAGAGGTGCCATCA

1.5 数据分析 2 结果

采用 SPSS 17.0 软件进行单样本 t 检验检测
2.1 亚硒酸钠对大菱鲆幼鱼生长性能和形体指
数据分布的正态性，若数据服从正态分布，对
标的影响
数据进行单因素方差分析，若检测到显著性则
采用 Turkey 进行组间差异性多重比较。结果用 相比于 DP 组，DN 组大菱鲆幼鱼的 FBW、
平均值±标准误 (mean±SE) 表示。用 GraphPad WGR、SGR、PER 和 CF 均显著降低 (P<0.05)，
prism5 软件 (GraphPad Software Inc.，美国) 进行 FCR 则显著升高 (P<0.05)。对比低鱼粉组，D4
图形表示。DP 和 DN 组的独立方差 t 检验结果 和 D5 组幼鱼成活率显著增加 (P<0.05)；D2、D3
用星号“*” 表示， D1、D2、D3、D4、D5 组与 和 D4 组 WGR、SGR 显著提高 (P<0.05)；D1~
DN 组、DP 组采用单因素方差分析 (One-Way D4 组幼鱼肥满度也显著增加 (P<0.05)；PER 在
ANOVA)。单因素方差分析结果用字母表示， D4 组 显 著 增 加 (P<0.05)； FCR 则 在 D2 和 D4
显著性水平设为 P<0.05。 组显著降低 (P<0.05)。随着低鱼粉饲料中亚硒

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